[发明专利]一种免筛选原/真核双表达载体及其构建与应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原/真核双表达载体及其构建方法、应用所述原/真核双表达载体进行免筛选PCR重组克隆目的基因的方法以及获得的包含目的基因的重组载体。本发明提供的原/真核双表达载体具备兼容的原核表达调控元件和真核表达调控元件，因此克隆入本发明载体的目的基因既能进行原核表达又能进行真核表达。本发明载体在Kozak序列与真核加尾信号序列之间含有一个高效自杀基因表达盒，因此采用本发明提供的PCR重组克隆技术克隆目的基因时，目的基因将插入本发明提供的原/真核双表达载体的Kozak序列与真核加尾信号序列之间并替换原有的高效自杀基因表达盒，从而自动筛选出阳性重组载体克隆。因此，应用本发明载体仅需一对PCR引物和两次PCR反应即可获得目的基因的原/真核双表达重组载体，无需使用内切酶、连接酶和其它DNA修饰酶，极大地节约时间成本和经济成本。

主权项

1.一种原/真核双表达载体，其包含真核启动子及其表达调控元件，原核启动子及其表达调控原件，Kozak序列、真核加尾信号序列和原核终止子，其特征在于：原核启动子及其核糖体结合位点RBS序列位于真核启动子序列与Kozak序列之间，Kozak序列位于原核启动子的RBS下游5‑10bp的位置，原核终止子位于真核加尾信号序列下游。