[发明专利]CRISPR/Cas9靶向敲除人乙肝病毒P基因及其特异性gRNA有效
| 申请号： | 201611259587.3 | 申请日： | 2016-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106701763B | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 周勇;申友锋 | 申请（专利权）人： | 重庆高圣生物医药有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 400039 重庆市九龙坡区二*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，更具体地说，本发明涉及基于CRISPR/Cas9系统的向导RNA（gRNA）序列及其组合在用于特异性靶向敲除乙型肝炎病毒cccDNA P基因的gRNA。本发明根据CRISPR/Cas9的设计原则，设计了30个gRNA，其序列表见SEQ ID NO.1‑30所示，并且将其构建在PX458载体上，筛选出4个最高效率的gRNA。在人肝癌细胞株(HepG2.2.15)中利用这4条gRNA及其组合指导的CRISPR/Cas9系统，可以有效的敲除人乙型肝炎病毒cccDNA P基因。利用本发明制备的特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA的gRNA能够精确靶向乙型肝炎病毒cccDNA并且实现基因敲除。该制备方法操作简单、gRNA靶向性好，CRISPR/Cas9系统的敲除效率高。 | ||
| 搜索关键词： | 乙型肝炎病毒 敲除 特异性靶向 靶向 制备 基因工程技术 人肝癌细胞株 人乙肝病毒 基因敲除 设计原则 靶向性 构建 筛选 | ||
【主权项】：
1.在CRISPR/Cas9特异性敲除乙型肝炎病毒cccDNA P基因中用于特异性靶向乙型肝炎病毒cccDNA P基因的gRNA，其特征在于，所述gRNA在乙型肝炎病毒cccDNA P基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 11任意一条序列所述。
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