[发明专利]一种从发酵液中分离纯化环孢菌素A的方法在审
| 申请号： | 201611241709.6 | 申请日： | 2016-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108250275A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 闻建华;闻铭远;傅红 | 申请（专利权）人： | 天津领世生物科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C07K7/64 | 分类号： | C07K7/64;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 韩晓梅 |
| 地址： | 300382 天津市西青*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供一种从发酵液中分离纯化环孢菌素A的方法，包含以下步骤：(1)环孢菌素A的提取；(2)大孔吸附树脂层析；(3)PS30RPC型聚合物纳米微球柱层析；(4)结晶纯化洗脱液真空浓缩并结晶，用冷丙酮石油醚洗涤，最后真空干燥得无色粉末状环孢菌素A纯品。本发明方法经发酵液提取、非极性大孔吸附树脂层析、PS30RPC型聚合物纳米微球柱层析、结晶纯化得纯度大于98.5％环孢菌素A，收率为70％以上。本发明采用等浓度洗脱，没有复杂的中间步骤溶剂置换过程，工艺操作简捷，适于工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 环孢菌素A 聚合物纳米 分离纯化 结晶纯化 发酵液 柱层析 微球 非极性大孔吸附树脂 大孔吸附树脂层析 溶剂置换过程 发酵液提取 石油醚洗涤 工艺操作 真空浓缩 中间步骤 冷丙酮 洗脱液 无色 层析 收率 洗脱 | ||
【主权项】：
1.一种从发酵液中分离纯化环孢菌素A的方法，其特征在于：其过程包含以下步骤：(1)环孢菌素A的提取向发酵液中加NaOH调PH值为中性，加入有机溶剂，搅拌提取5～8小时，将提取液滤出菌体收集滤液，所述有机溶剂是甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种；(2)大孔吸附树脂层析用型号为HZ816、HP20、X‑5或H103的非极性大孔吸附树脂装柱，对树脂进行预处理，提取液上样，用洗涤剂处理上样后的树脂，然后洗脱液洗脱并收集洗脱液，减压浓缩去除有机溶剂或减压浓缩去除有机溶剂加入乙酸乙酯萃取含环孢素A的水溶液再减压浓缩去除有机溶剂，得浓缩物待用；(3)PS30RPC型聚合物纳米微球柱层析将PS30RPC型聚合物纳米微球装柱，将萃取浓缩液上样，用丙酮，乙酸乙酯与水的混合溶剂洗脱，收集纯度合格的环孢菌素A洗脱液；(4)结晶纯化洗脱液真空浓缩并结晶，用冷丙酮石油醚洗涤，最后真空干燥得无色粉末状环孢菌素A纯品。
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