[发明专利]利用鱼类下脚料和固定化酶制备缓释性海参饵料的方法

摘要

本发明公开了利用鱼类下脚料和固定化酶制备缓释性海参饵料的方法。其解决现有鱼类下脚料直接投喂海参无法消化利用的问题。其是在培养基中接种鱼肠道中分离筛选得到的产蛋白酶菌株，培养出种子菌液；将鱼类下脚料肉糜放入种子菌液中发酵，形成发酵液；将壳聚糖溶液注射到氢氧化钠和甲醇混合溶液中，凝结成中空球形壳聚糖载体；载体放入戊二醛水溶液中活化；将酶包裹在空心球壳聚糖载体中，形成固定化酶；再将固定化酶与发酵液投放到海参养殖水域。本发明的方法工艺合理，操作可行。其固定化酶的稳定性高，半衰周期长，对鱼类下脚料发酵液缓慢酶解，释放海参饵料，同时对沉积的残饵起到降解作用，减少了投饵次数，降低人工成本。

主权项

1.利用鱼类下脚料和固定化酶制备缓释性海参饵料的方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：/n（a）鱼类下脚料发酵处理/n（a1）发酵种子菌液的培养/n在DAE培养基中接入W2菌种，控制温度20～25℃，在150～180r/min条件下，培养2～3d，得种子菌液，所述的种子菌液OD600为1.0～1.2；其中，所述的DAE培养基的配方为：蛋白胨0.4～0.8g，酵母膏0.05～0.2g，磷酸铁0.01～0.02g，海水90～100ml；所述的W2菌种为鱼肠道中分离筛选得到的产蛋白酶菌株，该W2菌种与所述的DAE培养基的接种比例为1:300～500；/n（a2）鱼类下脚料发酵液的制备/n选取鱼下脚料为原料，研磨至肉糜状；称量肉糜状鱼类下脚料放入步骤(a1)制得的种子菌液中，控制温度20～25℃，在150～180r/min条件下，培养2～3d，取发酵液，得鱼类下脚料发酵液；其中，所述的肉糜状鱼类下脚料与种子菌液的料液比为1:20～25；/n（b）固定化酶的制备/n（b1）载体制备/n称取壳聚糖溶解于浓度为20～30%的盐酸溶液中，配成壳聚糖溶液；然后将制得的壳聚糖溶液注射到含15%的氢氧化钠和30%甲醇混合溶液中，凝结成中空球形壳聚糖；其中，所述的壳聚糖与盐酸溶液的料液比为1:3～5，所述的壳聚糖的脱乙酰度为80%～85%；/n（b2）载体活化/n将步骤（b1）制得的中空球形壳聚糖放入浓度为4～8%的戊二醛水溶液中，于室温下搅拌反应4～6h，然后4℃静置过夜，去上清液后用水清洗2～3次，去除残余的戊二醛，得戊二醛活化处理的中空球形壳聚糖；其中，所述的中空球形壳聚糖与戊二醛水溶液的料液比为1:2～3；/n（b3）酶的包埋/n将步骤（b2）制得的戊二醛活化处理的中空球形壳聚糖分别加入不同pH 值缓冲液配置的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶制剂中，室温下搅拌反应2～3h ，于4℃静置过夜，用水清洗去除游离酶，即得固定化的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶；其中，所述的中性蛋白酶的缓冲液pH 值为6.8～7.5；所述的碱性蛋白酶的缓冲液pH 值为8.5～10.5；所述的酸性蛋白酶的缓冲液pH 值为4.0～4.5；/n（c）投放/n将步骤（b3）制得的固定化的中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶与步骤（a2）制得的鱼类下脚料发酵液按料液比为1:50～100投入海参养殖水域中。/n