[发明专利]高抗癌活性T细胞的筛选方法和应用在审
| 申请号： | 201611080683.1 | 申请日： | 2016-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN108118029A | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 张长风 | 申请（专利权）人： | 深圳宾德生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高抗癌活性T细胞的筛选方法，包括以下步骤：提供分离的人外周血单个核细胞；提供CD27抗体包被磁珠；检测CD3和CD27双阳性细胞的比例；使用CD27抗体包被磁珠筛选CD27阳性目标细胞亚群。本发明首次采用CD27抗体包被磁珠对筛选具有高抗癌活性的T细胞特定亚群，简便易操作，成本低，便于得到离体生长情况好、再刺激扩增性强、肿瘤杀伤能力高且持久的高品质细胞免疫产品。本发明还提供了该筛选方法在免疫细胞治疗中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 筛选 抗体包被磁珠 抗癌活性 人外周血单个核细胞 免疫细胞治疗 离体生长 杀伤能力 细胞免疫 细胞亚群 阳性目标 高品质 双阳性 扩增 亚群 应用 肿瘤 细胞 刺激 检测 | ||
【主权项】：
一种高抗癌活性T细胞的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提供CD27抗体包被磁珠；提供分离的人外周血单个核细胞；(2)检测CD3和CD27双阳性细胞的比例：将步骤(1)中分离出的人外周血单个核细胞重悬在X‑VIVO 15无血清培养基中，得到第一细胞重悬液；向所述第一细胞重悬液中加入第一荧光染料标记的鼠抗人CD27抗体与第二荧光染料标记的鼠抗人CD3抗体，孵育15‑50min，采用流式细胞仪检测所述孵育后的细胞中CD3与CD27双阳性细胞的百分比；(3)使用CD27抗体包被磁珠筛选CD27阳性目标细胞亚群：将步骤(1)中分离出的人外周血单个核细胞，采用X‑VIVO 15无血清培养基重悬，得到第二细胞重悬液；根据所述CD3和CD27双阳性细胞的比例，将所述CD27抗体包被磁珠按照与双阳性细胞个数比为(2‑5):1的比例加入到所述第二细胞重悬液中，混匀后，置于细胞培养箱中培养40‑60min；将所得培养混合液在施加磁场的情况下静置，弃去上清液，并撤去磁场；之后加入X‑VIVO 15无血清培养基重悬，得到含CD27阳性目标细胞亚群的磁珠混悬液，即，含高抗癌活性T细胞的磁珠混悬液。
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