[发明专利]一种以鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种利用组织培养技术进行鸡头黄精种苗快速繁殖的方法，包括外植体的选择、消毒、处理、启动培养、鳞茎球的分化、增殖、鳞茎分蘖苗的诱导、试管苗的生根培养、温室炼苗和移栽等步骤，建立了鸡头黄精快速繁殖技术体系，其中鳞茎球增殖系数达6.7，试管苗生根率达98％,温室移栽成活率达90％以上，本发明的技术方案是一种高效、快捷的繁殖技术，短时期内即可实现规模化种苗生产，在一定程度解决了鸡头黄精种苗资源短缺的问题。

主权项

一种以鸡头黄精鳞茎为外植体的种苗快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选择与消毒：选择秋季新鲜、成熟的当年生鸡头黄精鳞茎球，除去基部残余的老根，先用流水冲洗30min，然后投到体积份数为2％的次氯酸钠溶液中浸泡20min，再用清水冲洗干净，接着转入超净工作台，在超净工作台上先用75％的乙醇浸泡20s，然后用无菌水冲洗3‑4遍，再转入0.1％的升汞溶液中浸泡8min，该升汞溶液每升含0.1mL吐温20，然后用无菌水冲洗4‑5次后备用；(2)材料的处理：将即步骤(1)得到的的鳞茎球用无菌滤纸吸干表面的水分，在超净工作台内用刀刮去栓皮层，然后将鳞茎球先横切为2块，保留有萌动芽的上半部分，再将下半部分纵切为2块，将这3块鳞茎作为外植体备用；(3)启动培养：在无菌条件下将步骤(2)处理好的外植体接种到启动培养基中，每瓶接种1块，该培养基是在Ms培养基中额外添加了1.0mg/L～3.0mg/L的6‑BA、0.5mg/L～1.0mg/L的NAA和10.0mg/L～20mg/L病毒唑，蔗糖30g/L，琼脂粉5.0g/L，调整pH值为5.8，培养温度18±1℃，置暗培养条件下培养12‑15天，直至鳞茎膨大，切面少量愈伤化；(4)鳞茎分化：将步骤(3)得到的培养的鳞茎整块转入鳞茎分化培养基，该鳞茎分化培养基以Ms培养基为基本培养基，额外添加细胞分裂素6‑BA 1.0mg/L～2.0mg/L、生长素NAA 0.5mg/L～1.0mg/L和病毒唑5.0mg/L～10.0mg/L，蔗糖40.0g/L，琼脂粉5.0g/L，调整pH值为5.8，培养温度22±1℃，置光照培养箱中，每天光照14h，光照强度1500Lx～2000Lx，培养40‑50天，直至从膨大的鳞茎块周围分化出小的鳞茎球；(5)继代增殖培养：切取步骤(4)诱导产生的小的鳞茎球，接种到鳞茎球增殖培养基上，该鳞茎球增殖培养基以Ms培养基为基本培养基，额外添加6‑BA 0.5mg/L～1.0mg/L、NAA 0.1mg/L～0.5mg/L，蔗糖40g/L，琼脂粉5.0g/L，pH值为5.8，培养温度22±1℃，置光照培养箱中，每天光照14h，光照强度1500Lx～2000Lx，培养20‑30天，直至部分小鳞茎球长出分蘖小苗，此时升高培养温度至24±1℃，继续培养15‑20天，直至小鳞茎基部增殖出一簇一簇的小鳞茎球；(6)生根培养：将步骤(5)得到的长出分蘖绿苗的鳞茎球切割出来，分别接种于生根培养基中进行生根培养，该生根培养基以1/2Ms培养基为基本培养基，额外添加0.5mg/L的NAA和0.1mg/L的IBA，0.5g/L的活性炭，蔗糖30g/L，琼脂粉5.0g/L，调整pH值为5.8，培养温度24±1℃，置光照培养箱中，每天光照14h，光照强度1500Lx～2000Lx，培养25‑30天，小苗长至3.0cm‑4.0cm高，长出5‑8条根，准备进行试管苗移栽；(7)炼苗移栽：将步骤(6)中生根的试管苗开盖后置于温室中，保持温度23℃～26℃，湿度65％～75％，光强2000Lx～2500Lx的条件下炼苗5～7天，然后取出苗，在清水中洗掉培养基，移栽到配制好的移栽基质中，该移栽基质由草炭土、椰糠和蛭石按5:2:3的体积比例混合，置塑料小拱棚中，保持湿度75％左右，光强2000Lx～2500Lx，保持通风，培养25‑30天，移去拱棚，增加光强从而使试管苗逐渐适应自然光照条件，待叶片硬化后，将鸡头黄精种苗移栽于大田即可。