[发明专利]一种基于碳氮流定向调控的混菌发酵“一锅法”生产微生物油脂的方法

摘要

本发明适用于生物质资源转化利用技术领域，提供一种基于碳氮流定向调控的混菌发酵“一锅法”生产微生物油脂的方法，具体的，通过敲除里氏木霉的主要β‑葡萄糖苷酶基因，使得混菌发酵过程中，其主要利用生物质原料中的氮源合成纤维素酶，将生物质主要水解为自身难代谢的寡糖，同时创造诱发产油酵母油脂过量积累的氮源胁迫环境；产油酵母弯曲隐球酵母则在氮限制下，将水解所得的寡糖转运至胞内大量导向油脂合成。本方法实现非常简单，可以有效避免混菌发酵过程中非产油菌株消耗过多碳源导致油脂产量低的突出问题，实现生物质原料中碳/氮源的定向转化，显著提高油脂产量和得率，充分利用了生物质资源，从产油微生物菌体提取的微生物油脂可作为制备生物柴油和油脂化工产品的原料。

主权项

1.一种基于碳氮流定向调控的混菌发酵“一锅法”生产微生物油脂的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：预处理生物质原料，调整固液质量比至5％‑20％，不添加或者少量添加营养成分，调节pH至4.0‑6.0，高温湿热灭菌，制备混菌发酵培养基；将里氏木霉主要的β‑葡萄糖苷酶基因敲除，获得里氏木霉工程菌，所述β‑葡萄糖苷酶基因为Cel3a、Cel1a或Cel1b；挑取里氏木霉工程菌和产油酵母，分别接种于对应的液体种子培养基中，得到工程菌种子液和产油酵母种子液，所述产油酵母为弯曲隐球酵母Cryptococcus curvatus；将两种种子液接种至所述混菌发酵养基中，于25℃‑37℃通气培养，直至培养基中碳水化合物及其聚合物浓度之和低于5g/L，终止发酵，固液分离收集沉淀物；沉淀物采用酸热‑有机溶剂法提取油脂。