[发明专利]制备木薯钙调蛋白单克隆抗体的方法及该方法制备的抗体有效
| 申请号： | 201611003904.5 | 申请日： | 2016-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN106749654B | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 欧文军;余厚美;安飞飞;罗秀芹;秦于玲;陈松笔 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 |
| 主分类号： | C07K16/16 | 分类号： | C07K16/16 |
| 代理公司： | 北京汇知杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11587 | 代理人： | 蔡伦 |
| 地址： | 57173*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明提供一种制备木薯钙调蛋白单克隆抗体的方法及该方法制备的抗体，所述方法包括以下步骤：用纯化的融合蛋白ACP‑CaM与佐剂免疫小鼠；用生理盐水稀释的融合蛋白ACP‑CaM腹腔冲击小鼠；取所述小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞；用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆化直至出现阳性单克隆率为100％；排除抗体与标签蛋白ACP有交叉反应的阳性杂交瘤细胞；采用小鼠体内诱生腹水法制备钙调蛋白单克隆抗体；纯化所述钙调蛋白单克隆抗体。通过本发明方法制备的钙调蛋白单克隆抗体具有高效价、高稳定性和高特异性。 | ||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 钙调蛋白 制备 小鼠 阳性杂交瘤细胞 抗体 融合蛋白 木薯 骨髓瘤细胞融合 间接ELISA检测 生理盐水稀释 阳性单克隆 标签蛋白 高稳定性 交叉反应 佐剂免疫 高效价 脾细胞 稀释法 腹水 腹腔 克隆 体内 筛选 融合 | ||
【主权项】：
1.一种制备木薯钙调蛋白单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)用融合蛋白ACP‑CaM与佐剂一起免疫小鼠，所述融合蛋白ACP‑CaM的序列是SEQ ID NO.4；2)用含融合蛋白ACP‑CaM的溶液腹腔冲击所述小鼠；3)取所述小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；4)筛选获得阳性杂交瘤细胞；5)对所述阳性杂交瘤细胞进行克隆化直至出现阳性单克隆率为100％；6)在所述阳性单克隆率为100％的阳性杂交瘤细胞中，排除其抗体与标签蛋白ACP有交叉反应的阳性杂交瘤细胞；7)将步骤6)中获得的阳性杂交瘤细胞获得并纯化所述钙调蛋白单克隆抗体。
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