[发明专利]一种高效表达Microcin J25的工程菌株及其发酵工艺有效
| 申请号： | 201610985222.2 | 申请日： | 2016-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN106497856B | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 谯仕彦 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学;北京龙科方舟生物工程技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京世誉鑫诚专利代理事务所(普通合伙) 11368 | 代理人： | 孙国栋 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效表达Microcin J25的工程菌株及其发酵工艺，其中，该工程菌株通过下述方法构建而成：分别将Microcin J25野生型基因簇的McjA、McjB+McjC+McjD基因构建到2个质粒中，转化大肠杆菌MC41OO，从而产生出一株高效表达Microcin J25的工程菌，该工程菌的保藏编号为CGMCC No.12902。本发明的有益之处在于：本发明通过对MccJ25野生型基因簇进行改造，使McjABCD基因位于不同质粒并转化大肠杆菌MC4100所构建的工程菌株能够高效表达MccJ25，实验室50L罐表达量达到600mg/L以上水平，工业生产30T罐表达量达到500mg/L水平。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 microcinj25 工程 菌株 及其 发酵 工艺 | ||
【主权项】：
1.利用高效表达Microcin J25的工程菌株发酵生产Microcin J25的工艺，其特征在于，包括以下步骤：Step1：准备种子罐，罐内培养基的组成为10g/L蔗糖+45g/L酵母浸粉+3g/L磷酸氢二钾+2g/L磷酸二氢钾+0.5g/L硫酸镁，初始pH≥6.2；Step2：将菌种接种于种子罐内，进行扩大培养；Step3：准备发酵罐，罐内培养基的组成为10g/L蔗糖+50g/L酵母浸粉+3g/L磷酸氢二钾+0.5g/L硫酸镁，初始pH6.2‑6.5；Step4：将种液接种于发酵罐内，进行发酵培养，其中：高效表达Microcin J25的工程菌株通过下述方法构建而成：分别将Microcin J25野生型基因簇的McjA、McjB+McjC+McjD基因构建到2个质粒中，转化大肠杆菌MC41OO，从而产生出一株高效表达Microcin J25的工程菌，该工程菌的保藏编号为CGMCC No.12902；在Step2中，培养的条件为：35℃‑37℃，120rpm，通气20m3/h；在Step2中，培养的时间为：8‑10h；在Step2中，培养过程中适当调整培养基的pH值，使pH≤7.0；在Step4中，培养的条件为：35℃‑37℃，80rpm，通气200m3/h；在Step4中，培养的时间为：17‑19h；在Step4中，培养过程中前12h控制培养基的pH≤7.0。
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