[发明专利]一种制备艾塞那肽的固相合成方法

摘要

本发明公开了一种制备艾塞那肽的方法，主要解决现有技术存在的合成步骤复杂、偶联难度大、后期分离困难等技术问题。技术方案包括如下步骤：1）将Fmoc‑Rink Amide Linker和PEGMatrix树脂混合反应得到Fmoc‑Rink Amide PEGMatrix树脂；2)采用Fmoc固相合成法逐一偶联具有保护基团的氨基酸及类脯氨酸假二肽片段，得到侧链全保护的多肽树脂；3）将侧链全保护的多肽树脂进行切割，把多肽从树脂上裂解下来同时去除侧链保护基得到艾塞那肽粗品，粗肽再经高效液相色谱分离纯化、冻干后得到艾塞那肽。本发明采用的制备艾塞那肽的工艺方法具有操作简便、粗肽纯度高、综合收率高的特点。

主权项

一种制备艾塞那肽的固相合成方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将Fmoc‑Rink Amide Linker和AM PEGMatrix树脂混合反应得到Rink Amide AM PEGMatrix树脂；（2）采用Fmoc固相合成法按照从C端至N端的顺序逐一偶联三十三个芴甲氧羰基保护氨基酸及三个类脯氨酸假二肽片段X、Y、Z，得到侧链全保护的多肽树脂，如式I所示；His(trt)‑Gly‑Glu(otbu)‑X‑Phe‑Thr(tbu)‑Ser(tbu)‑Asp(otbu)‑Y‑Lys(boc)‑Gln(trt)‑Met‑Glu(otbu)‑Glu(otbu)‑Glu(otbu)‑Ala‑Val‑Arg(pbf)‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu(otbu)‑Trp(boc)‑Leu‑Lys(boc)‑Asn(trt)‑Gly‑Gly‑Pro‑Z‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tbu)‑Rink Amide PEGMatrix树脂式I式中：X= Gly‑Thr(psi(me,me)pro)；Y= Leu‑Ser(psi(me,me)pro)；Z= Ser(tbu)‑Ser(psi(me,me)pro)；（3）加入切肽试剂对侧链全保护的肽链树脂进行裂解，将三十九肽从树脂上裂解下来并去除侧链保护基团，同时打开序列中三个假二肽片段的五元环，得到艾塞那肽粗品，如式II所示；粗品再经高效液相色谱分离纯化、冻干精制得到艾塞那肽；His‑Gly‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Leu‑Ser‑Lys‑Gln‑Met‑Glu‑Glu‑Glu‑Ala‑Val‑Arg‑Leu‑Phe‑Ile‑Glu‑Trp‑Leu‑Lys‑Asn‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser‑Ser‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser‑NH2式II。