[发明专利]基于纳米金‑DNA复合材料检测蛋白质的方法

摘要

本发明提供一种基于纳米金‑DNA复合材料检测蛋白质的方法，包括纳米金‑DNA复合物的制备、纳米金‑DNA‑蛋白质三元复合物的生成、纳米金催化硝基苯酚和硼氢化钠反应(显色体系)、目测反应液由黄色变成无色的时间(CCT值)、根据不同蛋白质的CCT/CCT0值绘制LDA图，以及将已知浓度的待测蛋白质加入上述显色体系，计算待测蛋白质的CCT/CCT0值，结合LDA图从而对待测蛋白质进行识别。本发明建立在线性判别分析技术的基础上，仅需通过肉眼观察，并用计时器记录溶液颜色变化的时间，无需借助任何昂贵的仪器，即可成功识别出不同蛋白质，检测限达到30nM，为蛋白质高通量快速检测提供新的技术手段。

主权项

基于纳米金‑DNA复合材料检测蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、纳米金颗粒的制备：通过柠檬酸钠还原氯金酸制得，氯金酸溶液浓度为50mM，氯金酸和柠檬酸钠的摩尔比为3.5‑3.8:1，所得溶液中纳米金颗粒的平均粒径为13‑18nm；S2、纳米金‑DNA复合物的制备：向上述含有纳米金颗粒的溶液50μL中加入浓度为1μM的一端修饰有巯基的DNA溶液10μL，所述DNA为poly(A)15，得到纳米金‑poly(A)15复合物；S3、向上述含有纳米金‑DNA复合物的溶液60μL中分别加入M1浓度的11种蛋白质溶液各50μL，于37℃孵育10min；同时以ddH2O为空白对照，即向上述含有纳米金‑DNA复合物的溶液60μL中加入ddH2O 50μL，于37℃孵育30min；其中，所述11种蛋白质包括胰蛋白酶、牛血红蛋白、牛血清蛋白、人血清蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、辣根过氧化酶、软铁蛋白、细胞色素‑C、纤维原蛋白和刀豆球蛋白；S4、纳米金催化硝基苯酚和硼氢化钠反应生成氨基苯酚：向S3所得溶液110μL中加入浓度为5mM的硝基苯酚溶液200μL和浓度为0.6M的硼氢化钠溶液200μL，利用裸露的纳米金表面催化其反应；S5、目测观察溶液由黄色变成无色的反应时间，即CCT值，分别记下不同蛋白质对应的CCT值，以及空白对照ddH2O对应的CCT0值，并分别计算不同蛋白质对应的CCT/CCT0值，绘制表格；S6、将所述DNA替换为poly(C)15，重复S1～S5；S7、将所述DNA替换为poly(T)15，重复S1～S5；S8、将针对上述三种DNA绘制的反应不同蛋白质CCT/CCT0值的表格输入软件IBM SPSS Statistics 19，从而得到不同蛋白质对应的LDA图；S9、按照S1和S2分别制备针对上述三种DNA的纳米金‑DNA复合物溶液，分别向三种纳米金‑DNA复合物溶液60μL中加入M1浓度的待测蛋白质溶液50μL，于37℃孵育30min；同时以ddH2O为空白对照；S10、向S9所得溶液110μL中加入浓度为5mM的硝基苯酚溶液200μL和浓度为0.6M的硼氢化钠溶液200μL，进行反应；目测观察溶液由黄色变成无色的反应时间，并计算CCT/CCT0值，代入S8所述软件中，根据LDA图显示结果，对待测蛋白质进行识别；步骤S3和S9中，300nM≤M1≤2000μM；所述poly(A)15是由15个碱基A组成的DNA片段，所述poly(C)15是由15个碱基C组成的DNA片段，所述poly(T)15是由15个碱基T组成的DNA片段。