[发明专利]一种五肽胃泌素合成方法

摘要

本发明涉及多肽合成技术领域，公开了一种五肽胃泌素合成方法，包括：1)制备树脂(1)；2)固相法合成五肽胃泌素肽树脂：以步骤1)所得的树脂(1)为载体通过固相合成法，依次偶联Fmoc‑Met‑OH，Fmoc‑Trp‑OH，Boc‑β‑Ala‑OH；得到五肽胃泌素肽树脂；3)切割，得到五肽胃泌素粗品；4)通过HPLC检测粗品纯度，经纯化、转盐、冻干后得五肽胃泌素精品。本发明方法的合成工艺简单，减少了合成难度，减少杂质(纯度在98％以上)，降低成本，提高了收率。

主权项

1.一种五肽胃泌素合成方法，其特征在于：包括以下步骤：1)制备树脂(1)：将树脂2‑Chlorotrityl Chloride Resin在有机溶液DCM或DMF中浸泡，使树脂2‑Chlorotrityl Chloride Resin充分溶胀；用有机溶液DMF或DCM溶解片段Fmoc‑Asp‑Phe‑NH₂、DIPEA后，与树脂2‑Chlorotrityl Chloride Resin混合震荡，常温下过夜反应使片段充分连接在树脂上后，抽掉溶液，用DMF，DCM，无水甲醇各洗三遍；然后加入过量无水甲醇震荡或搅拌1‑4h封闭树脂，抽干，得到树脂(1)：2)固相法合成五肽胃泌素肽树脂：以步骤1)所得的树脂(1)为载体通过固相合成法，依次偶联Fmoc‑Met‑OH，Fmoc‑Trp‑OH，Boc‑β‑Ala‑OH；得到五肽胃泌素肽树脂；具体方法如下：2.1)树脂预处理：将树脂(1)用DMF或DCM浸泡充分溶胀，抽掉后用DMF洗净；2.2)加入脱帽试剂：向树脂(1)中加入其2‑3倍体积量的脱帽试剂反应4‑6min，然后抽滤，用DMF洗涤，抽滤，再添加树脂(1)2‑3倍体积量的脱帽试剂反应8‑12min，去除Fmoc保护基团；然后洗涤6遍，洗涤剂依次为：DMF、无水甲醇、DMF、DCM+DMF、DMF、DMF或用DMF洗6遍，抽掉；以DMF为溶剂加入1.2‑3倍摩尔量的Fmoc‑Met‑OH，和偶联剂，1.2‑6倍摩尔量的有机碱，偶联1‑3小时，用茚三酮检测反应进程，偶联完全后抽掉反应液，用DMF洗净；重复2.2)中上述步骤直至完成最后一个氨基酸Boc‑β‑Ala‑OH；用DMF洗三遍，DCM洗三遍，无水甲醇洗三遍；完成洗涤和树脂收缩，干燥得到五肽胃泌素肽树脂；3)切割：以DCM为溶剂，配制体积比为2％的TFA切割试剂，进行冷冻；取出后向切割试剂中加入步骤2)所得的五肽胃泌素肽树脂，在‑10至10℃下震荡18‑22min；然后升温至23‑27℃震荡1.5‑2.5h；抽滤，收集滤液；滤液加入有机碱，调解pH至中性，旋蒸去掉溶液，用石油醚或乙醚洗涤3‑6遍，干燥得到五肽胃泌素粗品；4)通过HPLC检测粗品纯度，经纯化、转盐、冻干后得五肽胃泌素精品；所述片段Fmoc‑Asp‑Phe‑NH₂的制备方法如下：以Fmoc‑Asp(otbu)‑OH和H‑Phe‑NH₂为原料，加入HOBT，DCC或DIC溶于有机溶剂THF或DCM或DMF中，25‑35℃下反应2‑8小时，反应结束后处理得到片段Fmoc‑Asp(otbu)‑Phe‑NH₂；用TFA酸解2‑6小时后处理得到Fmoc‑Asp‑Phe‑NH₂；步骤2.2)中所述脱帽试剂为体积比为20％的DBLK溶液；步骤2.2)中所述偶联剂选自TBTU、HBTU、HATU、PYBOP、HOBT、DIC一种或多种；所述有机碱为DIPEA或NMM；步骤2.2)中，用无水甲醇洗三遍时，无水甲醇每次洗涤时间为5‑10min。