[发明专利]一种鉴别三种药用白及的色谱指纹图谱方法

摘要

本发明公开了一种鉴别三种药用白及的色谱指纹图谱方法，包括以下步骤：预处理，多糖提取，多糖纯化，色谱指纹图谱的建立，未知种类白及的鉴定。本发明的优点在于：能通过白及主要药效成分‑白及多糖的分子量分布来有效区分和鉴别三种药用白及，能弥补中国药典2015版设定的白及鉴定方法的不足，因为后者是利用硅胶薄层点样层析的出现目的斑点的来作为其质量评价和判断标准，是一种单一的信息反馈，制假者利用检测方法的漏洞可以造假，而本方法更贴近化学组分的本质，是更精细的信息，制假者几乎无法仿制或仿制成本昂贵。

主权项

1.一种鉴别三种药用白及的色谱指纹图谱方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)：预处理将按照统计学方法取样得到的已知不同品种的药用白及材料切成薄片后混合，于60‑70℃的烘箱中烘干至恒重并粉碎成粉末；(2)：多糖提取①采用80℃‑90℃的无水乙醇索氏提取步骤(1)中所得粉末至回流液无色，挥干溶剂，将所得白及药渣按照料液比(1‑2)：(4‑6)加入蒸馏水中，并于75℃‑85℃水浴冷凝回流提取3‑5次，每次2‑3h；②合并滤液并向滤液中添加质量分数为0.3％‑0.5％的活性炭混匀脱色，于60℃‑65℃环境下静置1‑2h后抽滤；③抽滤后，将上述溶液于60℃‑65℃在旋转蒸发仪进行负压浓缩为原体积的30％‑35％，再加入无水乙醇，使其终浓度达到80％‑85％v/v，再于3‑5℃冰箱中静置2‑3h，接着，3000‑4000r/min转速下离心10‑20min后留取沉淀；④将沉淀用蒸馏水溶解即得药用白及粗多糖溶液；(3)：多糖纯化对步骤(2)所得的粗多糖溶液进行进一步的多糖纯化；(4)：色谱指纹图谱的建立①将不同分子量的葡聚糖标准品配置成4‑5mg/mL的水溶液分别进样于高效体积排阻色谱HPSEC中，再根据各相应色谱图计算多糖分子量标准曲线方程；②多糖纯化后的药用白及样品分别进样于高效体积排阻色谱HPSEC，获取相应色谱图，再根据多糖分子量标准曲线方程计算出各样品的色谱曲线各部分的相对分子量，最终建立相应已知的药用白及样品的HPSEC代表模式色谱图谱；(5)：未知种类白及的鉴定将未知种类的白及按照以上步骤(1)‑(4)进行处理，以得到其对应色谱指纹图谱，再将其与已建立的已知的白及样品的色谱指纹图谱进行相似度比较，当其相似度大于90％以上时，即可判定为同一类白及属植物，否则不是同一种属。