[发明专利]一种特异性合成组胺瑞林的方法

摘要

本发明公开一种特异性合成组胺瑞林的方法，包括如下步骤：以氯树脂为起始树脂载体，以碱性溶剂溶解巯基乙胺，在恒温条件下与氯树脂混合，反应过夜，得到乙胺化氯树脂；在乙胺化氯树脂中加入等体积比的甲醇和DIEA，进行封头反应；用DMF洗涤封头后的乙胺化氯树脂，然后依次向反应容器中投入活化后的Fmoc保护氨基酸，进行连续的肽链缩合反应；用微波技术处理反应的氯树脂，以DMF溶液洗涤反应后的肽链‑氯树脂；将全保护组胺瑞林‑氯树脂用切割试剂进行切割反应，得到组胺瑞林粗品肽。本发明采用Fmoc固相合成法，大大简化了工艺流程，缩短了生产时间，降低了生产成本，提高了反应缩合效率，其粗品收率达到了90％，具有可观的市场竞争力和应用前景。

主权项

1.一种特异性合成组胺瑞林的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)以氯树脂为起始树脂载体，以碱性溶剂溶解巯基乙胺，在恒温条件下与氯树脂混合，反应过夜，得到乙胺化氯树脂；(2)在乙胺化氯树脂中加入等体积比的甲醇和DIEA，进行封头反应，反应时间20‑30min；(3)用DMF洗涤封头后的乙胺化氯树脂，然后依次向反应容器中投入活化后的Fmoc保护氨基酸，以20％哌啶/DMF溶液为脱保护试剂，进行连续的肽链缩合反应；(4)每次投入缩合的Fmoc保护氨基酸反应20‑30min后，用微波技术处理反应的氯树脂，以DMF溶液洗涤反应后的肽链‑氯树脂；(5)将全保护组胺瑞林‑氯树脂用切割试剂进行切割反应，用‑20℃低温预冷的乙醚进行沉降，得到组胺瑞林粗品肽；步骤(1)所述氯树脂为2‑Cl(Trt)‑Cl Resin；所述氯树脂乙胺化反应中以DCM/DIEA为溶剂，在30℃恒温条件下反应过夜；步骤(2)所述封头反应试剂体积比为甲醇：DIEA＝1:1配置的混合溶液，反应容器置于摇床上摇晃反应，摇床转速20‑30r/min；步骤(3)所述的Fmoc‑保护氨基酸依次为Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Arg(pbf)‑OH、Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑D‑His(Bzl)‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Trp(Boc)‑OH、Fmoc‑His(Trt)‑OH、Fmoc‑Pyr‑OH，所述缩合反应中反应温度为28℃，反应时间为20‑60min；步骤(3)所述组胺瑞林肽链的缩合反应中以DIC/HOBT为缩合剂和活化剂，以DMF溶液洗涤反应的氯树脂，反应时间为20‑60min，反应温度为28℃‑30℃条件；步骤(4)所述微波技术反应条件是指在Fmoc‑氨基酸正常缩合反应后，向反应容器中加入适量的DIEA，然后将氨基树脂微波15s，微波功率25％；步骤(5)所述全保护组胺瑞林‑氯树脂的切割试剂体积比为TFA:TIS:H2O＝95:2.5:2.5，每克树脂使用8‑10ml切割试剂，将低温乙醚加入到切割后的多肽中，进行离心沉降，得到组胺瑞林粗品肽。