[发明专利]条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型及其构建方法

摘要

本发明公开了一种条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型及其构建方法，构建方法为：先获得可诱导型Spp1过表达转基因载体；再获得转基因F0代小鼠；与野生型小鼠交配，传代建系，获得F1代小鼠；选择在骨髓、脾脏、淋巴结以及胸腺均高表达的F1代小鼠作为后续的实验品系，获得转基因工具小鼠；将转基因工具小鼠与Cre转基因小鼠交配，即得。本发明构建得到的转基因小鼠模型为可诱导的白血病模型，在没有诱导剂的情况下Spp1不表达不发病，在诱导剂作用的情况下Spp1过表达，引发白血病的发生，较常规的转基因小鼠模型具有更好的可控性，可根据实验需要调整需维持的种群数量。

主权项

1.一种条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：A、根据Spp1基因的序列，采用常规方法获得gRNA；B、以pLVX‑EF1a‑ires‑puro质粒为模板，PCR扩增获得EF1a启动子片段，BamHI和EcoRI酶切EF1a启动子片段和pcDNA3‑Loxp‑Stop‑Loxp‑Spp1质粒，连接获得可诱导型Spp1过表达转基因载体；C、SmaI和PvuI酶切上述可诱导型Spp1过表达转基因载体，凝胶回收包含EF1a promoter‑Loxp‑Stop‑Loxp‑Spp1的片段，受精卵供体雌鼠超排卵后雌鼠雄鼠合笼，将见栓的雌鼠处死收集处于单细胞期的受精卵，进行雄原核显微注射；将正常发育为两细胞的受精卵移植到假孕雌鼠子宫，假孕雌鼠所生小鼠即为转基因F0代小鼠；D、将上述转基因F0代小鼠与野生型小鼠交配，传代建系，获得F1代小鼠；选择在骨髓、脾脏、淋巴结以及胸腺均高表达的F1代小鼠作为后续的实验品系，获得转基因工具小鼠；E、将上述转基因工具小鼠与Cre转基因小鼠交配,获得条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型。