[发明专利]一种制备高支低芳寡肽的方法

摘要

一种制备高支低芳寡肽的方法，属于分离纯化技术领域。本发明以干燥植物蛋白粉为原料，经过制备植物蛋白碱性蛋白酶水解液、制备C末端为芳香族氨基酸水解液、制备脱C末端芳香族氨基酸水解液、制备超滤分离液、制备脱芳香族氨基酸寡肽溶液、制备高支低芳寡肽冻干粉及制备再生大孔吸附树脂柱的步骤，制备出F值高达21～26的高支低芳寡肽。本发明以苯乙烯基骨架的大孔吸附树脂替代活性炭分离芳香族氨基酸及含芳香族氨基酸寡肽，具有分离效率高、精度高，可反复使用等优势；采用了多种现代化工技术和设备，具有操作方便，条件温和，节约能源，生产成本低等特点；并且实现了原料的充分利用，无“三废”产生，是典型的绿色生产工艺，便于推广应用。

主权项

一种制备高支低芳寡肽的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：(1)制备植物蛋白碱性蛋白酶水解液称取过80～160目的干燥植物蛋白粉，包括大米分离蛋白粉、小麦朊粉、玉米醇溶蛋白粉或大豆分离蛋白粉，按照干燥植物蛋白粉质量与纯净水体积之比为1∶8～16(kg/L)的比例，在搅拌下将其分散于纯净水中20～30min；再升温至50～60℃，用稀氢氧化钠溶液调节pH值为8.5～10后保温10～20min；接着，按照碱性蛋白酶(包括诺维信3.0T或2709碱性蛋白酶)与干燥植物蛋白粉质量之比为1∶40～60(kg/kg)的比例加入诺维信3.0T或2709碱性蛋白酶，在50～60℃区间搅拌反应40～60min，收集该水解液，用蠕动泵泵入管式离心机中，在1～2×104r/min的转速下连续离心分离，离心分离完成后分别收集离心渣和离心清液，对收集的离心渣，用于制备动物饲料的营养添加剂；对收集的离心清液，即为植物蛋白碱性蛋白酶水解液，用于下步制备C末端为芳香族氨基酸水解液；(2)制备C末端为芳香族氨基酸水解液第(1)步完成后，先向反应器夹层中通入冷却水，在搅拌下将植物蛋白碱性蛋白酶水解液的温度降低至35～40℃，再按照胰凝乳蛋白酶与干燥植物蛋白粉质量之比为1∶100～200(kg/kg)的比例向第(1)步获得的植物蛋白碱性蛋白酶水解液中加入胰凝乳蛋白酶，在35～40℃区间搅拌反应60～90min，收集该水解液，即制备出C末端为芳香族氨基酸水解液，用于下步制备脱C末端芳香族氨基酸水解液；(3)制备脱C末端芳香族氨基酸水解液第(2)步完成后，按照羧肽酶A与干燥植物蛋白粉质量之比为1∶200～300(kg/kg)的比例向第(2)步获得的C末端为芳香族氨基酸水解液中加入羧肽酶A，在35～40℃区间搅拌反应20～30min，收集该水解液，即制备出脱C末端芳香族氨基酸水解液，用于下步制备超滤分离液；(4)制备超滤分离液第(3)步完成后，将第(3)步制备的脱C末端芳香族氨基酸水解液泵入到截留分子量为2500～5000Da的超滤器中，在表压为0.05～0.5MPa的条件下超滤，直至超滤截留液与超滤滤过液体积比达到1/4～2/3(L/L)时止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液，对收集的超滤滤过液，即为超滤分离液，用于下步制备脱芳香族氨基酸寡肽溶液；对收集的超滤截留液，平均分子量为3500～6000Da，用于制备洗发水用水解植物蛋白浓缩液；(5)制备脱芳香族氨基酸寡肽溶液第(4)步完成后，将新购的、以苯乙烯基为骨架的活化大孔吸附树脂，例如AB‑8或HPD750或HPD500或HPD600，湿法装成大孔吸附树脂柱并连接恒流泵、紫外检测器和分部收集器，就组装出大孔吸附树脂柱分离系统，该系统组装完成后，按照该类活化大孔吸附树脂与第(4)步制备的超滤分离液体积比为1∶20～50(L/L)的比例，将该超滤分离液泵入大孔吸附树脂柱分离系统中，泵入超滤分离液的速度为1～4倍树脂柱体积/小时，泵入完成后，分别收集吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱和脱去芳香族氨基酸或脱去含芳香族氨基酸寡肽的过柱流出液，对收集的吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，用于制备芳香族氨基酸和含芳香族氨基酸寡肽；对收集的脱去芳香族氨基酸或脱去含芳香族氨基酸寡肽的过柱流出液，用于下步制备高支低芳寡肽冻干粉；(6)制备高支低芳寡肽冻干粉第(5)步完成后，将第(5)步收集的脱去芳香族氨基酸或脱去含芳香族氨基酸寡肽的过柱流出液泵入纳滤器中，在表压为0.5～1.5MPa，温度为15～45℃的条件下进行纳滤，直至纳滤截留液和滤过液的体积比达到1/4～2/3(L/L)时止，分别收集纳滤滤过液和纳滤截留液，对收集的纳滤滤过液，泵入生化处理池进行净化处理，达标后排放；对收集的纳滤截留液，置于低温冰箱中，在‑40～‑20℃下预冷5～10h后放入真空冷冻干燥机中，在温度为‑50～‑40℃、真空度为20～50Pa下冷冻干燥24～36h，即制备出高支低芳寡肽冻干粉；(7)制备再生大孔吸附树脂柱第(5)步完成后，对第(5)步收集的吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，先泵入纯净水洗涤，泵入的纯净水体积为大孔吸附树脂柱体积的2～4倍，泵入纯净水的流速为大孔吸附树脂柱体积的2～4倍/小时，洗涤完成后，分别收集洗涤过柱液和洗涤后的吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，对收集的洗涤过柱液，泵入生化处理池进行净化处理，达标后排放；对收集的洗涤后的吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，再泵入体积百分浓度为70～85％的乙醇溶液，洗脱吸附的芳香族氨基酸或含芳香族氨基酸寡肽，泵入体积百分浓度为70～85％的乙醇溶液体积为大孔吸附树脂柱体积的1.5～3倍，泵入该乙醇溶液的流速为大孔吸附树脂柱体积的2～4倍/小时，洗脱完成后，分别收集洗脱液和脱附芳香族氨基酸或脱附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，对收集的洗脱液，用于制备芳香族氨基酸和含芳香族氨基酸寡肽；对收集的脱附芳香族氨基酸或脱附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，用纯净水再次进行洗涤，泵入的纯净水体积为大孔吸附树脂柱体积的1～3倍，泵入纯净水的流速为大孔吸附树脂柱体积的2～4倍/小时，洗涤完成后，分别收集洗涤过柱液和洗涤后的脱附芳香族氨基酸或脱附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，对于收集的洗涤后的脱附芳香族氨基酸或脱附含芳香族氨基酸寡肽的大孔吸附树脂柱，即为再生大孔吸附树脂柱，可用于制备下批次吸附芳香族氨基酸或吸附含芳香族氨基酸寡肽；对收集的洗涤过柱液，含有高浓度乙醇，用于配制体积百分浓度为70～85％的乙醇溶液，洗脱下批次吸附于大孔吸附树脂柱的芳香族氨基酸或含芳香族氨基酸寡肽。