[发明专利]一种博来霉素的制备方法

摘要

本发明公开了一种博来霉素的制备方法。该方法包括将博来霉素发酵液滤液经大孔吸附树脂粗纯，经C18反相层析柱同步精纯与脱铜，再经大孔吸附树脂脱盐，得到纯度大于90%的博来霉素硫酸盐或盐酸盐。该方法采用精纯与脱铜为一体的C18反相层析精制工艺，制备所得博来霉素质量符合美国药典相关标准，总收率大于50%，且整个制备过程使用有机溶剂较少，安全环保,工艺简单易行，适用于大规模工业化生产。

主权项

1.一种博来霉素的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：博来霉素发酵液滤液经大孔吸附树脂粗纯，经C18反相层析柱同步精纯与脱铜，再经大孔吸附树脂脱盐，得到博来霉素，具体包括以下步骤：1）博来霉素发酵液用酸调节pH值至2.0～2.5，加入助滤剂搅拌均匀，过滤得到博来霉素滤液；2）博来霉素滤液用碱溶液调节pH值至6.0～6.5，通过大孔吸附树脂进行吸附，用甲醇‑硫酸水溶液或甲醇‑盐酸水溶液进行解吸，经HPLC检测收集解吸液；3）解吸液用碱溶液调节pH值至6.0～6.5，再进行1次大孔吸附树脂吸附，用甲醇水溶液进行解吸，解吸液浓缩至干，用甲醇溶解过滤，得到醇沉液；4）醇沉液减压浓缩，通过C18反相层析柱进行精制与脱铜，用含EDTA‑2Na的甲醇缓冲液作为洗脱液进行洗脱，收集层析液，浓缩除去溶剂，得到纯化液；5）纯化液上大孔吸附树脂进行脱盐，用甲醇水溶液进行解吸，HPLC检测收集解吸液，浓缩冻干，得到博来霉素；其中步骤1）所用助滤剂为珍珠岩或硅藻土，用量为每升发酵液加入助滤剂0.03～0.05千克；其中步骤2）、3)、5）中所用大孔吸附树脂为LX‑18、700F、HZ818、HZ803或LX‑20B树脂中的任意一种；其中步骤2）中的甲醇‑硫酸水溶液或甲醇‑盐酸水溶液中甲醇体积含量为10～20%，硫酸或盐酸浓度为0.03～0.05mol/L；其中步骤3）、5）中的甲醇水溶液的甲醇体积含量为50%～80%；其中步骤4）中C18反相层析柱填料为C18ME或C18TDE中的任意一种；其中步骤4）的洗脱液中EDTA‑2Na浓度为1.4～1.6g/L、甲醇体积含量为10%～30%，乙酸的体积含量为0.3～0.5%，氨水调pH至4.0～4.5。