[发明专利]一种利用酿酒酵母合成3-O-葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸的方法有效
| 申请号： | 201610851950.4 | 申请日： | 2016-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN106318966B | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 李春;赵雨佳;刘啸尘;蔚欢;樊婧婧 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C12P33/00;C12P19/56;C12R1/865 |
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| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工程菌生产3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸的方法，属于生物工程领域。本发明通过化学法合成经密码子优化的P450细胞色素单加氧酶基因、细胞色素还原酶基因以及UDP‑葡萄糖转移酶基因，结合酿酒酵母启动子和终止子组建相应的基因表达盒，通过DNA大片段组装方法构建基因表达载体，并将表达载体导入能够生产β‑香树脂醇的酿酒酵母中。首次实现了在酿酒酵母中直接合成植物次生代谢产物3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸，且合成的这两种化合物能够跨过酿酒酵母工程菌的细胞膜，简化下游分离萃取工艺，这为利用酿酒酵母生产低水溶性难跨膜的五环三萜类化合物提供了新思路。该方法工艺简单可用于发酵生产3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸。 | ||
| 搜索关键词： | 齐墩果酸 酿酒酵母 葡萄糖基 纤维二糖 五环三萜类化合物 植物次生代谢产物 合成 酿酒酵母工程菌 单加氧酶基因 基因表达载体 生物工程领域 细胞膜 生产 化学法合成 还原酶基因 基因表达盒 密码子优化 葡萄糖转移 表达载体 低水溶性 分离萃取 细胞色素 直接合成 工程菌 酶基因 启动子 香树脂 终止子 构建 可用 发酵 跨过 组装 大片 组建 | ||
【主权项】：
1.一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工程菌的构建方法，其特征在于，首先对来源于植物的细胞色素单加氧酶，细胞色素还原酶，以及UDP‑葡萄糖转移酶的基因进行密码子优化并利用化学法合成相应基因，其中包括来自蒺藜状苜蓿的P450细胞色素单加氧酶编码基因CYP716A12序列如SEQ ID NO.1所示，来自蒺藜状苜蓿的细胞色素还原酶编码基因MtCPR序列如SEQ ID NO.2所示，和来自欧洲山芥的UDP‑葡萄糖转移酶基因UGT73C10序列如SEQ ID NO.3所示，然后利用酿酒酵母的启动子和终止子分别构建P450细胞色素单加氧酶基因表达盒PGAL1‑CYP716A12‑TCYC1、细胞色素还原酶基因表达盒PGAL10‑MtCPP‑TADH1以及UDP‑葡萄糖转移酶基因表达盒PGAL1‑UGT73C10‑TCYC1，通过DNA大片段组装构建酿酒酵母表达载体pESC‑URA‑PGAL1‑CYP716A12‑TCYC1‑PGAL10‑MtCPP‑TADH1和pESC‑TRP‑PGAL1‑UGT73C10‑TCYC1，共同转入能生产β‑香树脂醇的酿酒酵母Sgib中，实现了同时生产齐墩果酸、3‑O‑葡萄糖基齐墩果酸和纤维二糖齐墩果酸。
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