[发明专利]一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法

摘要

本发明提供一种由Anti‑CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法，步骤如下：将去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE‑PEG2000‑MAL超声溶解后，在蒸馏水中透析得到聚合物胶束溶液；接着离心取上清液，即得去甲斑蝥素纳米胶束；将DTT、EDTA、Anti‑CA Ⅸ分别溶于PBS缓冲溶液中制成溶液；将EDTA溶液和DTT溶液加入anti‑CA Ⅸ溶液中，静置后加入乙酸乙酯萃取得到经还原的Anti‑CA Ⅸ溶液；将去甲斑蝥素纳米胶束用PBS缓冲溶液稀释成溶液，取溶液和经还原的Anti‑CA Ⅸ溶液置于试管中，孵化即得胶束纳米粒。本发明的胶束纳米粒可为新的抗癌药物及应用于临床提供实验依据。

主权项

1.一种由Anti‑CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法，其特征在于制备步骤如下：第一步：将去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE‑PEG2000‑MAL用乙醇超声溶解后，逐滴加入磁力搅拌的蒸馏水中，挥发30min，倒入透析袋中，所述透析袋的截留相对分子质量3500，在蒸馏水中透析后得到聚合物胶束溶液，所述聚合物胶束溶液中去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE‑PEG2000‑MAL的重量比为1:190～240:20～21；第二步：将聚合物胶束溶液在4000 r·min^‑1条件下离心30min，取上清液，即得去甲斑蝥素纳米胶束；第三步：将DTT溶于PBS缓冲溶液中，制成浓度为800 mmol/L的DTT溶液，将EDTA溶于PBS缓冲溶液中，制成浓度为500 mmol/L的EDTA溶液；将Anti‑CA Ⅸ溶于PBS缓冲溶液中制成浓度为0.5mg/mL的Anti‑CA Ⅸ溶液；第四步：将EDTA溶液和DTT溶液加入anti‑CA Ⅸ溶液中，在室温下静置2h，接着加入乙酸乙酯萃取得到经过还原的Anti‑CA Ⅸ溶液，其中EDTA溶液、DTT溶液和Anti‑CA Ⅸ溶液的体积比为1:5:50，每次加入的乙酸乙酯的体积与anti‑CA Ⅸ溶液的体积比为4:1；第五步：将制得的去甲斑蝥素纳米胶束用PBS缓冲溶液稀释成浓度为（5～20）mg·mL^‑1的去甲斑蝥素纳米胶束溶液，取去甲斑蝥素纳米胶束溶液和经过还原的Anti‑CA Ⅸ溶液置于一个试管中，室温条件下孵化12h，即得由Anti‑CA Ⅸ修饰去甲斑蝥素胶束纳米粒，其中去甲斑蝥素纳米胶束溶液和经过还原的Anti‑CA Ⅸ溶液的体积比为1:1。