[发明专利]一种评价破骨细胞骨吸收功能的方法

摘要

本发明提供了一种评价破骨细胞骨吸收功能的方法，所述方法是将长径小于30μm的骨粉固定于细胞培养板的底面，通过对培养前后定点照片的光密度分析，比较培养前后细胞培养板的透光度，从而反映细胞培养板内骨粉被吸收的程度，以评价破骨细胞的骨吸收功能。本发明的方法更加简便，克服了破骨细胞选择性吸附的问题，结果更加稳定、可靠，具备良好的可操作性和较高的灵敏度，在破骨细胞溶骨活性检测相关的研究中具有重要的应用价值。

主权项

1.一种评价破骨细胞骨吸收功能的方法，其特征在于，所述的方法是将长径小于30μm的骨粉固定于细胞培养板的底面，通过对培养前后定点照片的光密度分析，比较培养前后细胞培养板的透光度，从而反映细胞培养板内骨粉被吸收的程度，以评价破骨细胞的骨吸收功能；所述的方法包括以下步骤：a)制板：将长径小于30μm的骨粉进行灭菌，加入酒精溶液制成骨粉混悬液，充分混匀后滴加至细胞培养板的孔中，然后将加好的细胞培养板晾干，再向孔内加入丙酮，所述丙酮的加入量与孔底面积的比例为(10‑30)μl:1.75cm²，滴入丙酮后迅速翻转细胞培养板，1‑10min之内在孔底做标记，待孔底完全凝固后用蒸馏水冲洗，将未固定在孔底的骨粉冲洗干净，晾干；b)培养前拍照：用显微镜于标记位置拍照，同时选取一个不做任何处理的孔作为校正孔进行拍照，以用于校正培养后拍照时因显微镜参数不一致而产生的误差；c)细胞的接种和培养：在上述细胞培养板内进行细胞的培养，接种浓度为(0.5‑1.5)*10⁵个/ml，培养时间为8‑14d；d)培养后拍照：培养结束后除去细胞及残留核酸，待细胞培养板晾干后再次对标记位置和校正孔进行拍照；e)照片对比：对培养前后两次照片进行光密度分析，比较细胞培养前后细胞培养板的透光度，从而反映细胞培养板的孔内骨粉被吸收的程度；所述酒精溶液的体积浓度为70％‑90％，所述骨粉混悬液的浓度在2.5mg/ml以上。