[发明专利]基于水溶性阳离子聚合物的荧光可视化定量检测端粒酶活性的方法

摘要

本发明公开了基于水溶性阳离子聚合物的荧光可视化定量检测端粒酶活性的方法，包括以下步骤：1）在缓冲溶液中加入端粒酶识别序列作为引物；2）端粒酶对引物进行扩增，形成的富G序列；3）在钾离子的作用下富G序列形成G‑四链体；4）加入水溶性阳离子聚合物发生荧光能量共振转移；5）利用紫外可见灯观察颜色变化，并用荧光分光光度计对溶液的荧光强度进行检测。本发明利用阳离子聚合物和G‑四链体上标记的荧光素FAM发生荧光能量共振转移，在紫外灯下溶液颜色由蓝色变为绿色，颜色变化明显，可对端粒酶活性进行半定量检测；用荧光分光光度计精确测量FAM荧光强度变化，实现对端粒酶活性的准确定量，方法灵敏度高。

主权项

1.基于水溶性阳离子聚合物的荧光可视化定量检测端粒酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）细胞的培养以及端粒酶的提取得到裂解后的细胞；所述细胞为HeLa细胞；2）在含有5’端接有FAM的端粒酶引物的缓冲溶液中加入裂解后的细胞进行扩增得到重复的富G序列，在钾离子的存在下得到5’端接有FAM的G‑四链体；3）在5’端接有FAM的G‑四链体中加入水溶性阳离子聚合物CCP得到反应后的溶液；4）对反应后的溶液利用紫外可见灯进行可视化检测，同时利用荧光分光光度计对产生的荧光信号进行定量检测；所述步骤2）中的具体步骤如下：首先将裂解后的细胞用缓冲液进行不同程度的稀释，然后取2μL稀释液加入48μL的含有5’端修饰了FAM的端粒酶引物的浓度为0.02 ~ 4.2 mM端粒酶扩增液中，在25 ~ 37℃下反应15 ~ 120分钟得到富G序列，在钾离子的作用下形成5’端接有FAM的G‑四链体。