[发明专利]用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明属于生物制药技术，公开了一种用于制备卵黄抗体的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法及其卵黄抗体的制备方法。具体制备方法包括以下：用SDA固体培养基培养皮肤癣真菌，然后接种到SDA液体培养基中大量培养；过滤得到菌丝，用液氮低温研磨；加入蜗牛酶酶解细胞壁，得到的沉淀加入裂解液，充分作用后，上层液用PBS透析，即为皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原。再利用制备的细胞浆蛋白作为抗原，免疫母鸡，得到高效价的抗体，为皮肤癣疾病的预防与治疗提供了新思路。

主权项

1.一种利用皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原制备卵黄抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)选取20周龄产蛋母鸡；将皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原用PBS缓冲液稀释成1mg/mL的皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液；将皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液与弗氏完全佐剂按照等体积混合乳化，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL；首次免疫两周后进行第一次加强免疫，用等体积的弗氏不完全佐剂与皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原溶液混合乳化，采用皮下多点注射的免疫方式对每只母鸡注射0.5mL，以后每隔15天进行加强免疫一次，一共加强免疫4次，从第一次加强免疫开始收集免疫鸡蛋，并存放于4℃；/n所述皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原的提取方法包括以下步骤：/na、选取红色毛癣菌或须癣毛癣菌，先固体培养后采用液体培养；所述固体培养是采用SDA固体培养基；所述液体培养是采用SDA液体培养基；/nb、液体培养后进行冲洗和离心，得到的菌丝经过液氮研磨，酶解细胞壁，利用裂解液提取真菌的细胞浆蛋白，离心得到上清液；所述酶解细胞壁是采用蜗牛酶破壁，以及使用二硫苏糖醇还原蛋白质中二硫键；所述利用裂解液提取真菌的细胞浆蛋白的过程中使用冰浴，所述裂解液含有8M的尿素和1M的碳酸氢钠；/nc、将上清液透析后获得皮肤癣菌细胞浆蛋白抗原；所述透析是采用PBS透析三天；/n(2)将获得的免疫鸡蛋用酒精消毒，破壳收集蛋黄，与冻存蒸馏水按照体积比为1:9混匀，离心获得水溶性成分，采用PEG6000进行沉淀获得卵黄抗体干粉，于-20℃保存。/n