[发明专利]卵黄免疫球蛋白的提取工艺

摘要

本发明公开了一种卵黄免疫球蛋白的提取工艺，其包括以下步骤：a)抗原制备；b)蛋鸡免疫，收集鸡蛋；c)将去除膜衣的蛋黄搅拌均匀，置于‑20±3℃下至少冷冻24‑72h，快速解冻，稀释，调pH，静置过夜；d)离心过滤，超滤浓缩，用氯化钠溶液置换，硫酸铵沉淀，氯化钠溶解；e)透析、离心过滤，即得卵黄免疫球蛋白液。与现有技术相比，本发明采用一系列的离心、过滤、沉淀、透析等物理化学法进行卵黄免疫球蛋白的提取纯化，不仅操作方便，而且提取成本低，提取工艺容易控制，且经提取得到的卵黄免疫球蛋白能够很好的进行牙周炎的治疗，效果明显，本发明公开的提取工艺可以进行大规模的工业化生产。

主权项

1.一种卵黄免疫球蛋白的提取工艺，其包括以下步骤：a)抗原制备：收集牙龈卟啉单细胞菌种，培养得到牙龈卟啉单胞菌体，然后灭活、3‑5℃过夜、PBS缓冲液洗涤，之后将浓度为1.0×10¹¹CFU/ml的灭活菌体与等体积的弗氏佐剂吹打混匀成油包水状注射剂；b)蛋鸡免疫：选3‑5月龄隔离饲养的健康蛋鸡，经鸡胸部皮下肌肉注射免疫4次,监测记录卵黄中特异性抗体滴度变化趋势：当抗体滴度有明显上升趋势时开始大量收集鸡蛋；当发现滴度开始下降时加强免疫1次，同样监测卵黄抗体滴度，当卵黄抗体滴度有明显下降时停止收集鸡蛋，将鸡蛋置于阴凉处存放；c)将鸡蛋清洗、消毒，破壳，去除蛋清和蛋黄膜衣，将蛋黄搅拌均匀，置于‑20±3℃下至少冷冻24‑72h，快速解冻，加入8‑10倍体积纯化水稀释搅拌5‑6h，用盐酸溶液调pH至5.0‑5.1，在20‑23℃下静置过夜；d)将蛋黄稀释液离心过滤，得到的滤液超滤浓缩，用氯化钠溶液置换超滤浓缩液两次，置换所得浓缩液用硫酸铵沉淀，之后采用氯化钠溶液复溶；e)将上述复溶后液体用氯化钠溶液透析、离心过滤，即得卵黄免疫球蛋白液。