[发明专利]一种小松子组织培养再生体系构建方法

摘要

本发明公开了一种小松子组织培养再生体系构建方法，通过无性快繁技术获得株性稳定树种苗的技术方法。本发明以小松子树未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了小松子树组织培养再生体系，既解决小松子树优质种苗缺乏的问题，又可为今后开展小松子树大面积扩种转化工作提供了坚定保证。

主权项

一种小松子组织培养再生体系构建方法，其特征在于包括以下步骤： （1）种子消毒：选择初期成熟茶尚存青的小松子果实放入中等浓度的洗衣粉水浸泡32min，洗净后自来水冲洗2.5h，取出经消毒的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒32s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗8次后备用； （2）胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.6cm×0.6cm×0.6cm接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养46天，然后每天光照15小时，光照强度为3200lx，直至诱导形成胚性愈伤组织； （3）分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照18小时，光照强度为5500lx，置于培养温度为29℃的条件下培养直至形成丛生芽； （4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为3.6cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照18小时，光照强度为3200lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根； （5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约9cm的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。