[发明专利]一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法

摘要

一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于尿液样品经离心、稀释后直接引入反相色谱飞行时间质谱仪进行测定，经过峰对齐、校正和标准化、多变量统计分析和谱库检索可以找到喉癌志愿者和健康志愿者尿液中的差异代谢物。本发明为全新的尿液中差异代谢物的鉴定方法，通过差异代谢物可以反应喉癌患者尿液代谢物的变化情况，将有助于喉癌的诊断、临床治疗、预后判断及其发病机制的研究。

主权项

一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌尿液差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于，是以喉癌志愿者和健康志愿者尿液为样本进行测定、比较、筛选，具体包括以下工艺步骤：a、尿液在室温下解冻，然后在4 ºC以10000 g的速度离心10 min以去除颗粒物；b、用移液枪移取100 µL的尿液样本，并加入200 µL的纯水，混合均匀，然后装入色谱瓶中待测；c、反相色谱飞行时间质谱对所有尿液样本进行逐一分析，得原始数据，反相色谱条件为：采用ACQUITY UPLC HSS T3柱 规格2.1 × 100 mm, 1.8 µm进行分离，柱子温度为35 ºC，流动相A为0.1%的甲酸水溶液，流动相B为0.1%的甲酸乙腈，流动相流速为400 μL/min，梯度洗脱，总分析时间为22 min，进样量为5 μL；飞行时间质谱检测器的条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；ESI+模式：喷雾电压为3500 V，干燥气为4 L/min (180℃)，雾化气为0.04 MPa，碰撞能量为7 eV，传输时间为100 µs；d、将原始数据转换为mzXML的格式后，对数据进行峰对齐、校正、滤噪后，采用SIMCA‑P多元数据分析软件进行多变量统计分析，筛选VIP大于1的代谢物；e、用SPSS进行T检验，对于P<0.05且VIP大于1的为潜在差异代谢物；f、对于潜在差异代谢物，采用谱库检索或者标准品比对方法进行验证，即为差异代谢物。