[发明专利]用于多重核酸测序的Index和引物

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及用于多重核酸测序的Index和构建16SrRNA多重核酸测序文库的PCR引物。本发明提供的Index充分考虑到索引标签之间的序列差异程度、碱基识别率以及测序反应对不同Index序列的数据产出偏好性，将其包含于测序或建库引物后，混合测序反应得到的测序数据平衡性相对较好。本发明提供的PCR引物非常适用于土壤样品，特异性强，目的扩增条带清晰、无弥散现象，使得土壤样品中细菌多样性研究更加高效便捷准确。本发明提供的PCR引物中含有本发明提供的Index，获得的扩增产物中含有两个Index标签，将该Index用于混合样品测序，能够实现对不同测序文库的区分。

主权项

1.一组用于构建土壤样品中细菌16SrRNA多重测序文库的PCR引物，其特征在于：所述的一组PCR引物包括正向引物组和反向引物组；所述的正向引物组由以下引物中的一条或多条组成：引物Fl：其核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的序列，其中含有Index1：TGTACGCT；引物F2：其核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列，其中含有Index2：GACTAGTC；引物F4：其核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列，其中含有Index4：ACTAGATG；引物F5：其核苷酸序列为SEQ ID NO:5所示的序列，其中含有Index5：GATGTACA；引物F6：其核苷酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列，其中含有Index6：GATCATGC；引物F7：其核苷酸序列为SEQ ID NO:7所示的序列，其中含有Index7：CATGTCTA；引物F8：其核苷酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列，其中含有Index8：TATGTCAC；引物F9：其核苷酸序列为SEQ ID NO:9所示的序列，其中含有Index9：TCTAGCAT；引物F10：其核苷酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列，其中含有Index10：GATCACTA；引物F12：其核苷酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列，其中含有Index12：TCTACAGA；引物F13：其核苷酸序列为SEQ ID NO:13所示的序列，其中含有Index13：TACAGCGT；所述的反向引物组由以下引物中的一条或多条组成：引物R14：其核苷酸序列为SEQ ID NO:48所示的序列，其中含有Index14：GTGACTAT；引物R15：其核苷酸序列为SEQ ID NO:49所示的序列，其中含有Index15：TGCTACAT；引物R16：其核苷酸序列为SEQ ID NO:50所示的序列，其中含有Index16：TGATCTAC；引物R18：其核苷酸序列为SEQ ID NO:52所示的序列，其中含有Index18：TCGTGATA；引物R19：其核苷酸序列为SEQ ID NO:53所示的序列，其中含有Index19：ACTGCATA；引物R20：其核苷酸序列为SEQ ID NO:54所示的序列，其中含有Index20：ATAGTGCT；引物R22：其核苷酸序列为SEQ ID NO:56所示的序列，其中含有Index22：ACTCATGA；引物R23：其核苷酸序列为SEQ ID NO:57所示的序列，其中含有Index23：GTACATGA；引物R25：其核苷酸序列为SEQ ID NO:59所示的序列，其中含有Index25：CACGTGAT；引物R26：其核苷酸序列为SEQ ID NO:60所示的序列，其中含有Index26：CATCGAGT。