[发明专利]一种快速定性筛查铅离子的方法

摘要

本发明公开了一种快速定性筛查铅离子的方法，经过样品预处理、初筛反应场所的选择、初筛试剂的配置、初筛反应和定性分析步骤，完成对铅离子的筛查；本发明基于铅离子能显著抑制G4/hemin复合物过氧化物酶性，而其他金属离子不能明显抑制其过氧化物酶性特点，操作简便可行，方法重现性良好，能快速筛查出食品安全、环境监测等领域中的重金属铅，能满足日常大批量样品快速筛查铅离子要求。

主权项

1.一种快速定性筛查铅离子的方法，其特征在于：经过样品预处理、初筛反应场所的选择、初筛试剂的配置、初筛反应和定性分析步骤，完成对铅离子的筛查；具体步骤如下：（1）样品预处理：复杂的食品需经过强酸微波消解、电热板赶酸、高速离心和滤纸过滤处理，处理后的食品冷却后用缓冲液定量转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，混匀后待测；环境样品需添加0.1‑1g的活性炭吸附悬浮物和色素，滤纸过滤，调节pH值6.5‑7.5，混匀后待测；（2）初筛反应场所的选择：酶标板、小试管或小离心管；（3）初筛试剂的配置：10mmol/L氯化血红素储备液完成DMSO配置，‑20℃保存备用，所用G‑四链体G4 DNA、氯化血红素、过氧化物酶底物、H2O2和缓冲液均需现用现配；所用G4 DNA用缓冲液溶解，并在95oC环境下加热5min，冰上冷却至室温，在4oC条件下静置过夜；（4）初筛反应：将10µL 20µmol/L的G4 DNA、10µL 10µmol/L的氯化血红素和20µL 1mmol/L金属离子室温作用0.5h，然后加入80µL 5mmol/L过氧化物酶底物和80µL 5mmol/L H2O2，混合均匀；各物质终浓度分别为：G4 DNA浓度为1µmol/L，氯化血红素浓度为0.5µmol/L，金属离子浓度为0.1mmol/L，过氧化物酶底物浓度为2mmol/L，H2O2浓度为2mmol/L；（5）定性分析：用酶标仪监测铅离子抑制RET或HIF‑1α与氯化血红素形成复合物过氧化反应30秒内产生的自由基阴离子的动力学，记录414nm吸光度随时间的变化，每两秒钟采集一次吸光度信号，若待测样品较空白样品抑制动力学存在显著差异，可初步判断可能存在铅离子；反应5分钟后，肉眼目视比较待测样品与空白样品反应液颜色的深浅，若待测样品较空白样品存在颜色显著差异，可初步判断可能存在铅离子。