[发明专利]制备两种二抗共轭物及其用于同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原的方法

摘要

本发明涉及医学肿瘤标志物检测领域，具体是一种使用1,1’—二茂铁二甲酸/金@铂和硫堇/金@铂分别制备两种二抗共轭物及其同时对甲胎蛋白和癌胚抗原进行特异性检测的方法。使用1,1’—二茂铁二甲酸/金@铂和硫堇/金@铂分别制备两种二抗共轭物，用于构建的电化学免疫传感器对甲胎蛋白AFP和癌胚抗原CEA同时检测的方法，将修饰的玻碳电极放入甲胎蛋白和癌胚抗原的抗体混合溶液中，然后封闭未特异性结合的活性位点，取出玻碳电极后依次用不同浓度的甲胎蛋白抗原和癌胚抗原混合物修饰玻碳电极，使得抗原与抗体特异性结合，构建成夹心免疫传感器；将夹心免疫传感器使用差分脉冲伏安法DPV检测甲胎蛋白和癌胚抗原的浓度。

主权项

1.使用1,1’—二茂铁二甲酸/金@铂和硫堇/金@铂分别制备二抗共轭物的方法，其特征在于：按照如下的步骤进行步骤一、将硝酸钴Co(NO3)2·6H2O和聚乙烯吡咯烷酮PVP加入到水中溶解，在纯氮气条件下振荡15min，然后加入硼氢化钠NaBH4，在氮气氛围下搅拌30min，确保NaBH4全部反应完毕，溶液由无色变为深棕色，说明溶液中形成了钴纳米颗粒CoNPS；步骤二、氯金酸HAuCl4·4H2O溶液和氯铂酸钾K2PtCl6溶液逐滴加入到生成钴纳米颗粒CoNPS的溶液中，搅拌15min，使得钴纳米颗粒CoNPS与氯金酸HAuCl4、氯铂酸钾K2PtCl6充分反应，关闭氮气，离心除去钴Co模板，即得到溶有Au@Pt纳米壳核材料的溶液；步骤三、将2‑氨基乙醇酸溶液加入到制得的Au@Pt纳米材料水溶液中，室温下振荡反应5h，接着加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基琥珀酰亚胺NHS固体颗粒在室温下反应30min，然后加入1,1’—二茂铁二甲酸FcDC溶液，室温下过夜振荡，制得Fc/Au@Pt纳米复合物的溶液；步骤四、将硫代乙醇酸溶液加入到制得的Au@Pt纳米材料水溶液，室温下振荡反应5h，接着加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基琥珀酰亚胺NHS固体颗粒在室温下反应30min，然后加入硫堇Thi溶液，室温下过夜振荡，制得Thi/Au@Pt纳米复合物的溶液；步骤五、将甲胎蛋白AFP的二抗Ab2加入到步骤三制备的Fc/Au@Pt纳米复合物中，在4℃的环境下过夜孵育12h，对生成产物离心，用磷酸缓冲溶液PBS清洗后，离心清洗得到了Fc/Au@Pt/Ab2二抗共轭物，将癌胚抗原CEA的二抗Ab2加入到步骤四制备的Thi/Au@Pt纳米复合物中，在4℃的环境下过夜孵育12h，对生成产物离心，用磷酸缓冲溶液PBS清洗后，离心清洗得到了Thi/Au@Pt/Ab2二抗共轭物。