[发明专利]一种同时鉴别8种牛病原体的引物组合及GeXP检测方法

摘要

本发明公开了一种同时鉴别8种牛病原体的引物组合及GeXP检测方法。本发明的引物组合由引物对I、引物对II、引物对III、引物对IV、引物对V、引物对VI、引物对VII和引物对VIII组成。本发明还保护同时鉴别口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水泡性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒素大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒的GeXP检测方法。本发明建立的GeXP检测方法可以同时鉴别8种牛传染病的病原体。本方法具有高通量、特异性和灵敏度较高的特点，可用于牛病流行病学的监测和突发疫情的鉴别诊断，保障养牛业的健康发展。

主权项

引物组合，由引物对I、引物对II、引物对III、引物对IV、引物对V、引物对VI、引物对VII和引物对VIII组成；所述引物对I由引物FMDV‑F和引物FMDV‑R组成；所述引物FMDV‑F为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)序列表的序列1自5′末端第19至36位核苷酸所示的单链DNA分子；(a3)将(a1)或(a2)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物FMDV‑R为如下(a4)或(a5)或(a6)：(a4)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a5)序列表的序列2自5′末端第20至43位核苷酸所示的单链DNA分子；(a6)将(a4)或(a5)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对II由引物BTV‑F和引物BTV‑R组成；所述引物BTV‑F为如下(a7)或(a8)或(a9)：(a7)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a8)序列表的序列3自5′末端第19至41位核苷酸所示的单链DNA分子；(a9)将(a7)或(a8)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BTV‑R为如下(a10)或(a11)或(a12)：(a10)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a11)序列表的序列4自5′末端第20至37位核苷酸所示的单链DNA分子；(a12)将(a10)或(a11)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对III由引物VSV‑F和引物VSV‑R组成；所述引物VSV‑F为如下(a13)或(a14)或(a15)：(a13)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a14)序列表的序列5自5′末端第19至38位核苷酸所示的单链DNA分子；(a15)将(a13)或(a14)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物VSV‑R为如下(a16)或(a17)或(a18)：(a16)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(a17)序列表的序列6自5′末端第20至38位核苷酸所示的单链DNA分子；(a18)将(a16)或(a17)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对IV由引物BVDV‑F和引物BVDV‑R组成；所述引物BVDV‑F为如下(a19)或(a20)或(a21)：(a19)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(a20)序列表的序列7自5′末端第19至36位核苷酸所示的单链DNA分子；(a21)将(a19)或(a20)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物BVDV‑R为如下(a22)或(a23)或(a24)：(a22)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(a23)序列表的序列8自5′末端第20至44位核苷酸所示的单链DNA分子；(a24)将(a22)或(a23)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对V由引物BRV‑F和引物BRV‑R组成；所述引物BRV‑F为如下(a25)或(a26)或(a27)：(a25)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(a26)序列表的序列9自5′末端第19至40位核苷酸所示的单链DNA分子；(a27)将(a25)或(a26)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物BRV‑R为如下(a28)或(a29)或(a30)：(a28)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(a29)序列表的序列10自5′末端第20至37位核苷酸所示的单链DNA分子；(a30)将(a28)或(a29)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对VI由引物ETEC‑F和引物ETEC‑R组成：所述引物ETEC‑F为如下(a31)或(a32)或(a33)：(a31)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(a32)序列表的序列11自5′末端第19至36位核苷酸所示的单链DNA分子；(a33)将(a31)或(a32)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物ETEC‑R为如下(a34)或(a35)或(a36)：(a34)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(a35)序列表的序列12自5′末端第20至40位核苷酸所示的单链DNA分子；(a36)将(a34)或(a35)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对VII由引物IBRV‑F和引物IBRV‑R组成；所述引物IBRV‑F为如下(a37)或(a38)或(a39)：(a37)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(a38)序列表的序列13自5′末端第19至41位核苷酸所示的单链DNA分子；(a39)将(a37)或(a38)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物IBRV‑R为如下(a40)或(a41)或(a42)：(a40)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(a41)序列表的序列14自5′末端第20至36位核苷酸所示的单链DNA分子；(a42)将(a40)或(a41)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物对VIII由引物PPRV‑F和引物PPRV‑R组成：所述引物PPRV‑F为如下(a43)或(a44)或(a45)：(a43)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(a44)序列表的序列15自5′末端第19至44位核苷酸所示的单链DNA分子；(a45)将(a43)或(a44)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子；所述引物PPRV‑R为如下(a46)或(a47)或(a48)：(a46)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(a47)序列表的序列16自5′末端第20至36位核苷酸所示的单链DNA分子；(a48)将(a46)或(a47)经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的DNA分子。