[发明专利]一种建兰组培快速繁殖方法

摘要

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种建兰组培快速繁殖方法，包括以下步骤：植株预处理、材料选取、材料消毒、诱导培养、丛生芽继代增殖培养、生根壮苗培养及移栽，通过本发明采用的外植体和消毒方法，能大大提高外植体的诱导率，同时培养后的苗株成苗率高，长势良好，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养建兰提供了技术支持。

主权项

一种建兰组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)植株预处理：将叶长为10～12cm的成熟株母本，放置在培养室中进行培养，培养温度20～22℃，光照时间为15h/d，光照强度为4000～5000lx，培养时间50～60天；(2)材料选取：建兰预处理后，选取生长健壮及无病虫害长势良好的建兰，剪取植株中未开花或正在开花的花梗，剔除花梗上已开放的花朵及未开放的花蕾，切取花梗中部节位上的花梗芽作为外植体；(3)材料消毒：将外植体用清水冲洗表面的泥沙，冲洗时间为5～10min，冲洗后将外植体放置在洗洁精水中浸泡10min并用软刷毛刷去表面污垢，用清水冲洗30min，然后用体积分数为75％的酒精棉球擦拭外植体表面，用灭菌水清洗2～3遍，再将花梗芽上的苞叶去除，用手术刀把花梗节与芽相处的苞叶剔除干净，在用体积分数为75％的酒精棉球擦拭外植体，用灭菌水清洗2～3遍，再将花梗节段用质量分数为2％的过氧化氢溶液消毒两次，每次消毒时间为5～10min，且每次消毒后用灭菌水清洗4～5遍；(4)诱导培养：切除消毒后外植体的两端切口，将外植体接种在诱导培养基中进行预培养，培养时间为22～25d，前10天为暗培养，剩余时间为光培养，培养温度均为23～25℃，光培养时，光照时间为12h/d，光照强度为2000～2500lx；所述诱导培养基为：1/3MS+3～5mg/L 6‑BA+0.5～1.5g/L活性炭+0.3～0.5mg/L NAA+15％椰汁+30～40mg/L柠檬酸+22～27g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.4～5.5；(5)丛生芽继代增殖培养：将诱导培养后萌发的小芽，自基部剥离切割后，接种到继代培养基上，所述继代培养基为：B5+8～12mg/L KT+0.1～0.3mg/L 2，4‑二氯苯氧乙酸+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L柠檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.1～5.4，培养温度23～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为2000～2500lx；(6)生根壮苗培养：继代增殖培养后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：MS+3～6mg/L KT+0.5～0.8mg/L NAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L柠檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.5～5.7，培养时间为15～20d，培养温度23～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000～2500lx；(7)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。