[发明专利]一种血清胆固醇氧化物的测试方法

摘要

本发明提供一种血清中胆固醇氧化物的测试方法，所述方法包括：样品处理、皂化、固相萃取、HPLC分析。所述方法能够同时对血清中胆固醇体内自氧化的代表性产物分别或同时进行定量检测，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种检测血清中5α，6α‑环氧胆固醇、5β,6β‑环氧胆固醇、7‑酮基胆固醇、7β‑OH胆固醇、7α‑OH胆固醇的测试方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品处理：用氯仿‑甲醇萃取血清脂类，吸取氯仿层；(2)皂化：用KOH溶液、无水乙醇、BHT常温震荡皂化，包括：加入重量体积比为60％的KOH溶液、无水乙醇、BHT常温震荡皂化24h，其中KOH溶液和无水乙醇的加入量均为血清体积的10倍，BHT的终浓度为5‑50ng/mL；(3)固相萃取：皂化后的溶液过SPE固相萃取柱，包括：将皂化后的溶液用乙醚提取3次，再用蒸馏水洗涤2次，无水硫酸钠干燥后30℃旋蒸除去残留的溶剂；加入血清体积5倍的正己烷溶解后，过SPE固相萃取柱，经过体积比为95:5的正己烷：二乙醚、正己烷：体积比为90:10的二乙醚、体积比为82:20的二乙醚洗涤后，用体积比为60:20的丙酮：甲醇洗脱；(4)HPLC测试：液相色谱分离柱为腈基结合柱，使用体积比为95：5的正己烷：异丙醇以1ml/min的流速洗脱，测试器为示差折光测试器。