[发明专利]分离卵巢中不同种类单细胞的方法在审
| 申请号： | 201610519416.3 | 申请日： | 2016-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN106085950A | 公开（公告）日： | 2016-11-09 |
| 发明（设计）人： | 陈子江;马金龙;吕跃;赵涵;梁子君;王成栋 | 申请（专利权）人： | 山大生殖研发中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075;C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京汉昊知识产权代理事务所(普通合伙) 11370 | 代理人： | 黄可峻 |
| 地址： | 中国香港沙田香港科*** | 国省代码： | 中国香港;81 |
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| 摘要： | 本发明提供了用于分离哺乳动物早期卵泡获得单个卵母细胞和其单个颗粒细胞的方法。本发明的方法能够分离哺乳动物早期卵泡获得具有活性的单个卵母细胞及其相应颗粒细胞。本发明还提供了用于获得哺乳动物早期卵泡单个卵母细胞和其单个颗粒细胞的试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 分离 卵巢 不同 种类 单细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种获得哺乳动物的早期卵泡的单个卵母细胞和其单个颗粒细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)对哺乳动物卵巢组织进行钝性分离；(2)将哺乳动物卵巢组织碎块在约37℃下，在第一消化液中消化约20‑60分钟，例如约30分钟，所述第一消化液含有胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II或胶原蛋白酶IV或其混合物；(3)将步骤(2)得到的消化液混合物通过第一孔径细胞滤网，所述第一孔径细胞滤网的孔径为约40‑100μm(例如为约70‑80μm)，然后将滤液通过第二孔径细胞滤网，所述第二孔径细胞滤网的孔径为约8‑12μm(例如为约8μm)；(4)用培养液冲洗第二孔径细胞滤网内沉淀物，然后用培养液重悬沉淀；(5)吸出重悬溶液中的单个早期卵泡；(6)将吸出的单个早期卵泡清洗后，在第二消化液中消化约3‑10分钟，优选在5分钟内，所述第二消化液含有胰蛋白酶或Accutase；(7)将步骤(6)得到的消化液混合物转移到培养液中，通过分离得到单个卵母细胞以及其相应单个颗粒细胞。
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