[发明专利]一种念珠菌甘露聚糖Mn及其免疫亲和层析柱的制备方法

摘要

本发明提供了一种利用十六烷基三甲基溴化铵来制备白色念珠菌细胞壁甘露聚糖的方法。白色念珠菌细胞经过柠檬酸盐溶液中高温高压处理后，上清液在甲醇中沉淀得甘露聚糖粗品，使用十六烷基三甲基溴化铵先沉淀杂蛋白及核酸，然后与甘露聚糖络合形成沉淀，络合物沉淀用乙酸溶解后，用乙醇沉淀多糖，得到纯化甘露聚糖。然后用交联了念珠菌甘露聚糖Mn单克隆抗体的免疫亲和层析柱对甘露聚糖Mn进行处理，得到纯化的念珠菌甘露聚糖Mn，简便、高效、成本低，并能够有效的避免使用有毒有害的化学试剂。本发明还涉及一种念珠菌甘露聚糖Mn免疫亲和层析柱，可重复利用，有利于降低制备成本，提高制备效率，制备方法简单易行。

主权项

一种念珠菌甘露聚糖Mn免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将念珠菌甘露聚糖Mn单克隆抗体溶于溶液中，并与亲和层析基质混合成匀浆；(2)用交联缓冲液洗涤步骤(1)得到的匀浆，并离心，得到抗体与亲和层析基质的混合物；(3)用交联缓冲液重悬步骤(2)得到的抗体与亲和层析基质的混合物，向得到的混悬液中加入双功能结合剂，室温孵育20‑40分钟，并混匀，液固分离，得到亲和层析基质‑抗体交联复合物；(4)用封闭溶液洗涤步骤(3)得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物；(5)将步骤(4)得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物重悬于封闭溶液中，室温孵育1.5‑2.5小时，混匀；(6)装柱：将步骤(5)得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物填充入层析柱中，制得念珠菌甘露聚糖Mn免疫亲和层析柱。