[发明专利]离体诱导百合异源四倍体的方法

摘要

本发明属于植物的多倍体育种领域，具体提供一种离体诱导百合异源四倍体的方法，具体步骤如下：1)预培养；2)秋水仙素溶液配制；3)多倍体诱导；4)纯合四倍体的诱导和培养；5)鳞茎膨大培养；6)生根培养；7)倍性鉴定。本发明克服一般多倍体离体诱导过程中污染严重、嵌合体和诱导率低的缺陷；诱导方法操作简易，诱导成功率高；获得的四倍体植株经栽培生长正常，倍性稳定；本发明可作为百合远缘杂种育性恢复、遗传改良和异源四倍体新品种培育的重要方法。

主权项

1.一种离体诱导百合异源四倍体的方法，其特征在于，具体步骤如下：1)预培养：组培新铁炮百合远缘杂种得到小鳞茎，将小鳞茎的鳞片切片，接种到不定芽诱导培养基上预培养7天，得到预培养后的鳞片切片；所述新铁炮百合远缘杂种为‘回归’；所述组培新铁炮百合远缘杂种得到小鳞茎，为在高糖培养基中22±2℃，暗培养至得到直径为1.6-1.8cm的小鳞茎；所述小鳞茎的鳞片，为剥取小鳞茎外层和中层鳞片；所述切片，为横切成宽5-7mm的切片；2)秋水仙素溶液配制：将秋水仙素用二甲基亚砜助溶后配制成质量百分含量0.05％的溶液，高压灭菌，得到秋水仙素溶液；3)多倍体诱导：将1)所述预培养后的鳞片切片清洗后浸泡于2)所述秋水仙素溶液中进行诱导处理，诱导处理的时间为24小时，得到诱导后的鳞片切片；4)纯合四倍体的诱导和培养：将3)所述诱导后的鳞片切片清洗后，接种于不定芽诱导培养基中进行3个循环的继代培养，将嵌合体加以分离，得到再生植株，转入丛生芽生长培养基中培养，得到长大的再生植株；5)鳞茎膨大培养：将4)所述长大的再生植株接种于高糖培养基培养，得到鳞茎膨大植株；6)生根培养：将5)所述鳞茎膨大植株接种到生根培养基上培养，得到生根的鳞茎膨大植株；7)倍性鉴定：鉴定染色体倍性挑选四倍体，至此得到完整的百合异源四倍体；所述的不定芽诱导培养基为以MS培养基为基本培养基，6-BA浓度为2.0mg/L、NAA浓度为0.1mg/L、蔗糖的质量百分含量为3％、琼脂的质量百分含量为0.7％、pH值为5.8的培养基；所述的丛生芽生长培养基为以MS培养基为基本培养基，6-BA浓度为1.0mg/L、NAA浓度为0.2mg/L、蔗糖的质量百分含量为3％、琼脂的质量百分含量为0.7％、pH值为5.8的培养基；所述的高糖培养基为：以MS培养基为基本培养基，蔗糖的质量百分含量为8％、活性炭浓度为1g/L、琼脂的质量百分含量为0.7％、pH值为5.8的培养基；所述生根培养基为：以MS培养基为基本培养基，NAA浓度为0.2mg/L，蔗糖的质量百分含量为3％、琼脂的质量百分含量为0.7％、pH值为5.8的培养基。