[发明专利]带g6pd1303-1497位点缺失的转基因斑马鱼模型及构建方法有效
| 申请号： | 201610451399.4 | 申请日： | 2016-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN106035233B | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 舒莉萍;何志旭;吴西军;周艳华;夏海雄;宋锦;庹媛媛;尚鲁俊 | 申请（专利权）人： | 贵州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027;A01K67/02;C12N15/65;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 郑自群 |
| 地址： | 550004*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种带g6pd1303‑1497位点缺失的转基因斑马鱼模型，将g6pd基因带1303‑1497位点缺失的gata1‑g6pdM1303‑1497‑EGFP‑PBSK‑Isce I质粒与Isce I酶一起注入斑马鱼的单细胞期胚胎。本发明的优点是：同时驱动g6pd与EGFP基因，可实现1303‑1497位点缺失的突变型g6pd基因在红细胞中表达的“可示踪”观察。 | ||
| 搜索关键词： | g6pd1303 1497 缺失 转基因 斑马 模型 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建带g6pd1303‑1497位点缺失的转基因斑马鱼模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将g6pdM1303‑1497‑EGFP‑PCS2+，gata1‑PBSK‑IsceI质粒酶切连接构建gata1‑g6pdM1303‑1497‑EGFP‑PBSK‑Isce I质粒；(2)将所述gata1‑g6pdM1303‑1497‑EGFP‑PBSK‑Isce I质粒通过显微注射的方式注入单细胞期斑马鱼胚胎动物极胚盘内；(3)通过观察24hpf期胚胎是否表达绿色荧光筛选出转基因的胚胎并孵化养至成鱼作为F0代转基因斑马鱼；(4)以所述F0代转基因斑马鱼与野生型交配后产生的表达绿色荧光的胚胎孵化并养至成鱼作为F1代转基因斑马鱼；(5)通过观察胚胎EGFP荧光情况和基因组PCR法鉴定转入的g6pdM1303‑1497‑EGFP基因的表达和插入情况；所述转基因斑马鱼模型为：将g6pd基因带1303‑1497位点缺失的gata1‑g6pdM1303‑1497‑EGFP‑PBSK‑Isce I质粒与Isce I酶一起注入斑马鱼的单细胞期胚胎。
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