[发明专利]一株高效转化延胡索酸为L-天冬酰胺的重组大肠杆菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201610430229.8 | 申请日： | 2016-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN105925520B | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 马江锋;周慧媛;姜岷;董维亮;章文明;陈可泉;吴昊 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一株能够高效转化延胡索酸为L‑天冬酰胺的重组大肠杆菌，将耐铵型大肠杆菌BEW308中编码富马酸酶的基因fumA、fumB、fumC失活，再将编码L‑天冬氨酸酶和L‑天冬酰胺酶编码基因插入到编码富马酸酶fumAC基因的位置，即得到无苹果酸副产、少量L‑天冬氨酸积累并主产L‑天冬酰胺的重组大肠杆菌。本发明还公开了上述菌株的构建方法及应用。本发明可实现L‑天冬氨酸酶和L‑天冬酰胺酶的组成型高活性表达，并最终实现延胡索酸至L‑天冬酰胺的转化。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 转化 延胡索 天冬 重组 大肠杆菌 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一株高效转化延胡索酸为天冬酰胺的重组大肠杆菌，其特征在于，将耐铵型大肠杆菌BEW308中编码富马酸酶的fumA、fumB、fumC基因失活，再将编码L‑天冬氨酸酶的基因和编码L‑天冬酰氨酶的基因插入到编码富马酸酶的fumAC基因位置，即得高效转化延胡索酸为‑天冬酰胺的重组大肠杆菌；所述编码L‑天冬氨酸酶的基因序列如SEQ ID NO：1所示，所述编码L‑天冬酰胺酶的基因序列如SEQ ID NO：2所示；所述编码L‑天冬氨酸酶的基因的起始密码子上游有一段信号肽，该信号肽的基因序列如SEQ ID NO：3所示，将L‑天冬氨酸酶基因的终止密码子删除，在L‑天冬氨酸酶基因的末端与L‑天冬酰氨酶基因之间有一段连接序列，该连接序列如SEQ ID NO：4所示。
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