[发明专利]评价转基因植物花粉对蜜蜂毒理学效应的方法和花粉提取液及其制备方法

摘要

本发明公开了一种评价转基因植物花粉对蜜蜂毒理学效应的方法和花粉提取液及其制备方法，评价方法包括分别制备转基因和同一品种非转基因植物的花粉提取液；花粉提取液的制备包括采集植物花粉，粉碎，加入提取缓冲液进行震荡提取，提取完成后离心，上清液即为花粉提取液；提取缓冲液由一定浓度的KH2PO4、Na2HPO4、NaCl、KCl和吐温20组成；向花粉提取液中加入蔗糖，制得饲喂液；采用饲喂液喂食蜜蜂，比较蜜蜂死亡率，判断转基因植物花粉对蜜蜂的毒性。本发明能够模拟蜜蜂在自然情况下取食转基因花粉的真实情况。

主权项

一种评价转基因植物花粉对蜜蜂毒理学效应的方法，其特征在于，包括：(1)分别制备转基因植物和同一品种非转基因植物的花粉提取液；所述花粉提取液的制备方法包括：采集植物的花粉，将花粉粉碎，加入提取缓冲液进行研磨至95％以上花粉破壁后震荡提取，提取完成后离心，上清液即为所述的花粉提取液；所述的提取缓冲液的组成为：0.0018～0.0022mol·L‑1KH2PO4、0.01～0.012mol·L‑1Na2HPO4、0.12～0.14mol·L‑1NaCl、0.002～0.003mol·L‑1KCl、0.03～0.06％吐温20；所述的提取缓冲液以水为溶剂；花粉粉碎采用液氮研磨的方法，液氮研磨的时间为30～45min；所述提取的温度为4～8℃，时间为0.5～2h；所述的花粉与提取缓冲液的质量体积比为0.3～4：3；(2)向花粉提取液中加入蔗糖，制得饲喂液；(3)采用所述的饲喂液喂食蜜蜂，比较转基因组和非转基因组蜜蜂的死亡率，判断转基因植物花粉对蜜蜂的毒性。