[发明专利]一种原核表达载体的培养及其抗血清的制备方法

摘要

本发明涉及一种原核表达载体的培养及其抗血清的制备方法，属于突变或遗传工程技术领域。以大肠杆菌的“偏好”和“排斥”的密码子分别对人和蟾蜍PPDPF的ORF序列进行密码子优化与合成，分别获得替换后人和蟾蜍的PPDPF重组质粒；转化至大肠杆菌感受态细胞中；挑取单菌落接种于已加入Kan的LB液体培养基中培养形成菌液；菌液按1%接菌于灭菌过的LB培养液中，260rpm于37℃震荡培养至OD₆₀₀值达到0.7‑1，按1/1000的比例加入浓度不同的诱导剂IPTG，诱导两种重组蛋白的表达。将发明应用于原核表达载体及抗血清的指标，具有可实现定点突变等优点。

主权项

一种原核表达载体的培养方法，其特征在于：（1）原核表达载体的构建：以大肠杆菌的“偏好”和“排斥”的密码子分别对人和蟾蜍PPDPF的ORF序列进行密码子优化和合成，并连接到表达载体pET‑28b (+)上，分别获得密码子优化后人和蟾蜍的PPDPF重组质粒，蟾蜍和人的重组重组蛋白分子量分别为17.26kD和17.14kD；（2）重组蛋白的诱导表达：将步骤（1）的PPDPF重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中，37℃过夜培养获得大量单菌落；挑取单菌落接种于2mL已加入2μLKanamycin的LB液体培养基中，37℃过夜震荡220rpm培养形成菌液；菌液按1%接菌于灭菌过加入Kan至终浓度50μg•mL^‑1 的LB培养液中，260rpm于37℃震荡培养至OD值达到0.7‑1，取出一部分菌液作为对照组，其余菌液等分为四组，按1/1000的比例加入浓度不同的诱导剂IPTG，将所有菌液再放回恒温培养箱中37℃260rpm培养1‑4h，诱导两种重组蛋白的表达。