[发明专利]紫茎组织培养快速繁育方法

摘要

本发明提供一种紫茎组织培养快速繁育方法，包括外植体选择与消毒、从生芽诱导、丛生芽增殖、生根培养、壮苗培养和苗床培养等步骤。与紫茎传统育苗方法相比，本发明的方法不受紫茎种子数量和种子发芽率的限制，利用紫茎当年生新梢进行组织培养，获得紫茎幼苗，并将幼苗移栽到苗床中继续培养获得紫茎移栽苗，该繁育方法可有效提高紫茎的繁育系数，保留紫茎的优良遗传特性，幼苗成活率高达95％，移栽苗野外移栽成活率高达80％，可实现紫茎苗木的规模化生产和野外大面积育林生长，并为紫茎这一珍稀濒危植物的有效保护提供技术支持。

主权项

1.一种紫茎组织培养快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：A、选取性状优异的紫茎植株作母本，剪取其当年生新梢，取其顶端5‑10cm的枝条，将所述枝条用质量分数为2％的洗洁精水溶液浸泡20min，取出，用线状自来水冲洗15‑20min，再放入天然消毒液中浸泡30min，最后将所述枝条用无菌水冲洗3‑5次并用消毒滤纸除去其表面水分，得外植体，其中，所述天然消毒液的制备方法为：将10‑12重量份代代、7‑9重量份白千层、7‑9重量份蓝桉、6‑8重量份大蒜、5‑7重量份柠檬草和4‑6重量份丁香粉碎至50‑100目，加入500重量份的水室温下浸泡1h，再于60℃下真空回流提取2‑4h，过滤，所得滤液即为所述天然消毒液；B、将步骤A中得到的所述外植体用无菌解剖刀切割成0.5‑0.8cm的小段并转接到丛生芽诱导培养基中，于22‑26℃，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28‑30天，得第一丛生芽，其中，所述丛生芽诱导培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0‑2.5mg/L ZT，1.0‑1.5mg/L 6‑KT，1.0‑1.5mg/L 2.4.5‑T，15‑20g/L蛋黄液，4‑6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH值为5.5‑5.8；第一光照条件下培养时，光照强度为2000‑2200lux，光照时间为14‑16h/天；C、将步骤B中得到的所述第一丛生芽用无菌解剖刀切割成带有1‑2个芽的小块并分别转接到增殖培养基中，于22‑26℃，黑暗条件下培养2天后，转入第一光照条件下培养28‑30天，得第二丛生芽，其中，所述增殖培养基是以3/4MS培养基为基本培养基，还包括2.0‑2.5mg/LZT，1.5‑2.0mg/L 6‑KT，1.2‑1.5mg/L NAA，15‑20g/L蛋黄液，4‑6g/L大豆肽，30g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5.5‑5.8；D、将步骤C中得到的所述第二丛生芽转接到生根养基中，于22‑26℃，黑暗条件下培养6天后，转入第二光照条件下培养18‑20天，得完整植株，其中，所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，还包括1.2‑1.5mg/LNAA，0.8‑1.0mg/L IBA，0.8‑1.0mg/L多效唑，1‑3g/L大豆肽，35g/L蔗糖和8g/L琼脂，pH值为5.5‑5.8；第二光照条件下培养时，光照强度2200‑2400lux，光照时间为14‑16h/天；E、向所述生根培养基中加入0.5cm厚的无菌水，敞口培养7天后，将所述完整植株取出，转入壮苗培养基中，第三光照条件下培养28‑30天，得幼苗，其中，所述壮苗培养基是以MS培养基为基本培养基，还包括2.0‑2.5mg/L IBA，1.5‑1.8mg/L ZT，0.8‑1.0mg/L 6‑BA，0.8‑1.0mg/L多效唑，20‑25g/L蛋黄液，3‑5g/L活性炭，30g/L蔗糖和10g/L琼脂，pH值为5.5‑5.8；第三光照条件下培养时，光照强度2200‑2400lux，光照时间为14‑16h/天，光照时培养温度为22‑26℃，非光照时培养温度为16‑20℃；F、将步骤E中得到的所述幼苗移栽到苗床中继续培养5‑6个月，得紫茎移栽苗，最后将所述紫茎移栽苗进行野外移栽。