[发明专利]一种双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊及制备方法

摘要

本发明提供一种双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，包括以下步骤：（1）巯基化透明质酸的制备；（2）乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖的制备；（3）巯基化透明质酸上接枝二代异亚丙基保护吡喃半乳糖；（4）载药纳米胶囊的制备。该方法制备出的载药纳米胶囊与肿瘤细胞亲和性强，对高浓度的谷胱甘肽及酸性环境的双重高敏感响应性，实现在肿瘤细胞内高选择性的快速释药，抗肿瘤效率高，安全性好。 1

主权项

1.一种双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)巯基化透明质酸的制备

将透明质酸溶于浓度为0.01mol/L，pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，然后加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和1‑羟基苯并三唑，活化2‑3h，然后再加入胱胺二盐酸盐，搅拌反应12‑16h，用去离子水透析72h，最后加入二硫苏糖醇，透析，冷冻干燥后得巯基化透明质酸；其中透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、胱胺二盐酸盐和二硫苏糖醇的摩尔比分别为1‑2:3‑4:3‑4:3:5‑6；

(2)乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖的制备

将3‑氯‑2‑氯甲基丙烯和NaH溶于四氢呋喃中，然后加入异亚丙基保护的吡喃半乳糖和催化剂，65‑70℃加热回流22‑24h，加水终止反应，再用乙酸乙酯萃取产物，得乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖；其中3‑氯‑2‑氯甲基丙烯、NaH、异亚丙基保护的吡喃半乳糖和催化剂的摩尔比为3:3‑4:1‑2:0.005‑0.015；催化剂为KI、18‑冠醚‑6和15‑冠醚‑5按质量比为1:1:1混合所得的混合物；

(3)巯基化透明质酸上接枝二代异亚丙基保护吡喃半乳糖

将巯基化透明质酸和乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖溶于二甲基甲酰胺与磷酸盐缓冲液以体积比为1:3混合的混合液中，然后再加入2,2‑二甲氧基‑2‑苯基苯乙酮，在波长为365nm，功率为6W的紫外光下照射2‑3h后透析，冷冻干燥；其中，巯基化透明质酸、乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖和2,2‑二甲氧基‑2‑苯基苯乙酮的摩尔比为1‑2:0.5‑1:0.05‑0.1；

(4)载药纳米胶囊的制备

将溶解有抗肿瘤药物的氯仿与溶解有步骤(3)所得物的PBS溶液按体积比为1:20混合，在超声探头作用下，利用超声乳化法制备纳米胶囊，将得到的白色乳液置于黑暗环境下挥发除去溶剂中的氯仿，再利用去离子水透析，除去未被包裹的抗肿瘤药物后，冷冻干燥，形成载药纳米胶囊；其中抗肿瘤药物和步骤(3)所得物的质量比为1‑2.5:8‑10。

2.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(1)中透明质酸、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、胱胺二盐酸盐和二硫苏糖醇的摩尔比分别为1:3:3:3:5。

3.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(1)中搅拌反应时间为12h。

4.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中3‑氯‑2‑氯甲基丙烯、NaH、异亚丙基保护的吡喃半乳糖和催化剂的摩尔比为3:3.13:1:0.0075。

5.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中加热回流反应24h。

6.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(3)中巯基化透明质酸、乙烯基功能化的二代异亚丙基保护吡喃半乳糖和2,2‑二甲氧基‑2‑苯基苯乙酮的摩尔比为1:0.5:0.05。

7.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(4)中抗肿瘤药物和步骤(3)所得物的质量比为1:8。

8.根据权利要求1所述的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，步骤(4)中抗肿瘤药物为阿霉素和/或紫杉醇。

9.如权利要求1‑8任一项所述的制备方法制备出的双重细胞微环境敏感的抗肿瘤载药纳米胶囊。