[发明专利]同时检测糕点类食品中九种Amadori化合物浓度的方法

摘要

同时检测糕点类食品中九种Amadori化合物浓度的方法，本发明是制备甘氨酸与葡萄糖Amadori化合物、丙氨酸与葡萄糖Amadori化合物、α‑氨基丁酸与葡萄糖Amadori化合物、脯氨酸与葡萄糖Amadori化合物、天冬氨酸与葡萄糖Amadori化合物、异亮氨酸与葡萄糖Amadori化合物、谷氨酸与葡萄糖Amadori化合物、苯丙氨酸与葡萄糖Amadori化合物、色氨酸与葡萄糖Amadori化合物九种Amadori化合物混合母液及样品溶液，准备标准工作溶液，采用液相色谱‑串联三重四级杆质谱分析仪，分析检测得到糕点类食品样品溶液中九种Amadori化合物浓度。本发明方法准确可靠、灵敏度高，非常适合复杂基质糕点类食品中九种Amadori化合物的分析。

主权项

同时检测糕点类食品中九种Amadori化合物浓度的方法，其特征在于，方法步骤如下：(1)制备九种Amadori化合物混合母液：分别称取甘氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Gly)、丙氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Ala)、α‑氨基丁酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Amb)、脯氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Pro)、天冬氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Asn)、异亮氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Ile)、谷氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Glu)、苯丙氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Phe)、色氨酸与葡萄糖Amadori化合物(Fru‑Trp)标准品10mg于10mL容量瓶中，各采用质量浓度70％的甲醇水溶解并定溶，然后各分别移取5mL上述九种溶液于100mL容量瓶中，采用质量浓度70％的甲醇水定溶得到九种Amadori化合物混合母液；(2)准备标准工作溶液：分别移取0.02mL、0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.0mL九种Amadori化合物混合母液于10mL容量瓶中，采用质量浓度0.5％的甲酸水溶液定容，得到标准工作溶液系列；标准工作溶液系列中，九种Amadori化合物的浓度分别为0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.50μg/mL、1.00μg/mL；(3)制备样品溶液：进行糕点类食品中Amadori化合物的溶解、萃取与净化，具体步骤是称取1.0g糕点类食品于50mL离心管中，加入10mL甲醇，超声提取10min，10000r/min离心5min，上清液倒入另一离心管中，加入10mL正己烷，涡旋1min，10000r/min离心2min，弃去上层正己烷层，再加入10mL正己烷，涡旋1min，10000r/min离心2min，同样弃去上层正己烷层，下层甲醇在35℃条件下氮气吹干，加入2mL质量浓度0.5％的甲酸水溶液溶解后，经0.22μm过滤膜后得到样品溶液；(4)进行液相色谱‑串联三重四级杆质谱分析：采用液相色谱‑串联三重四级杆质谱分析仪，分析检测的液相色谱、质谱条件如下：色谱柱为WatersAcquity BEH C18(1.7μm，2.1mm×100mm)，柱温：25℃；流动相A为0.5％甲酸的水溶液，流动相B为甲醇溶液；梯度洗脱，条件为0～10min：95％A～0％A，10.1～14min：0％A，14.1～18min：95％A；流速：0.2mL/min，进样体积2μL；离子源：采用电喷雾电离源，扫描方式为正离子扫描，检测方式为多反应监测MRM，电喷雾电压500V，干燥气温度325℃，干燥气流量6L/min，鞘气温度380℃，鞘气流量10L/min，毛细管电压4000V；(5)绘制标准曲线及计算结果：分别吸取步骤(2)制备的不同浓度标准工作溶液进行LC‑MS/MS分析，在步骤(4)确定的仪器参数下，以九种Amadori化合物定量离子峰面积对其所对应的质量浓度进行线性回归，得到各目标化合物的标准工作曲线；再分别吸取步骤(3)制备的样品溶液进行LC‑MS/MS分析，在步骤(4)确定的仪器参数下，得到九种Amadori化合物定量离子峰面积，代入回归方程，计算得到样品溶液中九种Amadori化合物浓度。