[发明专利]一种早脆王枣的组培快繁方法

摘要

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种早脆王枣的组培快繁方法，包括外植体的建立、启动培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤，本发明针对早脆王枣这一品种进行研究，于不同阶段采用了最适合的培养基组成，繁殖系数高，生根率高，该方法操作简便，成本低，能有效、方便的在短时间内获得大量早脆王枣组培苗，而且所获得的组培苗成活率高，采用本发明的早脆王枣的组培快繁方法可以获得大量整齐一致，遗传性状稳定的再生植株，试验结果稳定，重复性良好，适合广西北部山区大面积区域种植，特别是喀斯特地貌山区种植。

主权项

一种早脆王枣的组培快繁方法，其特征在于，步骤如下：(1)外植体的建立：于3月初，剪取16‑18cm长、当年生优质粗壮的根蘖条，用自来水冲洗15‑20分钟后，于质量浓度为0.4%洗衣粉溶液中浸泡10‑13分钟后，用毛刷轻轻刷洗，再用自来水冲洗干净，然后将洗净后的根蘖条置于培养室中水培培养，培养至长出2～3cm的水培芽后，取出根蘖条，用质量浓度为75%的酒精浸泡32s，无菌水冲洗3‑4次，沥干水分，放到质量浓度为0.1%HgCL2溶液中浸泡消毒9‑10分钟，然后用无菌水冲洗6‑7次，用镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取水培芽作为外植体；（2）启动培养：将水培芽转入经灭菌后的启动培养基中培养，诱导不定芽的萌发，培养条件为温度25～27℃,光照强度为2200‑2500lx，光照时间17‑18h/d，在培养室中无菌培养，新芽萌发之后，将其转接到分生培养基中培养，在光照强度为2100‑2300lx，光照时间14‑16h/d，温度为25‑27℃的条件下，培养38‑42天；（3）继代培养：将植株茎段转接入经消毒后的继代培养基中培养，在培养温度为26‑28℃，光强 2300～25O0lx，光照时间为14‑15h/d的条件下培养35d；（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2‑2.5cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度 26～28℃，光强2100～22001x，光照时间15‑17h/d；（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长1.5～2.0 cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：26‑27℃，光照强度为3800‑5500lx，室内瓶炼7‑8天后，敞口炼苗5‑7天；（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用质量浓度为0.2%KMnO4溶液消毒过的椰糠+田园土+细河沙按照1.5‑2:1:3‑5的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％‑90%，温度 26～27℃，避免阳光直射，35‑38 天后，移出温室进行全光照炼苗6‑7d，及时浇水，然后移栽大田；所述步骤（1）中将根蘖条置于培养室中水培培养时的培养条件为：培养温度为26‑28℃，光照时间17‑18h/d，光照强度2500～3500lx，每20‑24小时换一次水；所述步骤（2）中的启动培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤1.22‑1.25mg/L +萘乙酸0.21～0.25mg/L+0.7%‑1%白砂糖+2.8%‑3%糖蜜+琼脂6g/L，培养基pH 值为6.1；所述步骤（2）中的分生培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤2.0‑2.3mg/L+萘乙酸0.42‑0.45mg/L+维生素H 1.7‑2.0mg/L+0.7%‑1%白砂糖+2.8%‑3%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；所述步骤（3）中继代培养基的成分为：MS+ N6苄基腺嘌呤2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+维生素C 1.0mg/L+维生素H 1.2‑1.4mg/L+谷氨酸1.6mg/L +1%白砂糖+3.5%‑4%糖蜜+琼脂8g/L, 培养基pH 值为6.0‑6.1；所述步骤（4）中生根培养基的成分为：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0.75‑0.85 mg/L+1%白砂糖+3.5%‑4%糖蜜+琼脂8g/L, pH=6.0‑6.2。