[发明专利]一种化橘红的组培快繁方法

摘要

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种化橘红的组培快繁方法，包括外植体的建立、启动培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤，本发明针对化橘红这一品种进行研究，于不同阶段采用了最适合的培养基组成，繁殖系数高，生根率高，该方法操作简便，成本低，能有效、方便的在短时间内获得大量化橘红组培苗，而且所获得的组培苗成活率高，苗木能够保持优树的优良遗传性状，采用本发明的化橘红的组培快繁方法可以获得大量整齐一致，遗传性状稳定的再生植株，试验结果稳定，重复性良好，可应用于大规模商品化育苗。

主权项

一种化橘红的组培快繁方法，其特征在于：步骤如下：(1)外植体的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘红头枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，用自来水冲洗10分钟后，于质量浓度为0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8‑12分钟，再用自来水冲洗干净，然后用质量浓度为75%的酒精浸泡35s，无菌水冲洗3‑4次，沥干水分，用质量浓度为1.0%的次氯酸钠消毒10‑12分钟，然后用无菌水冲洗7‑8次，用镊子夹取清洗好的茎段，在无菌操作台上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，剪取1.5‑2.5cm的带芽茎段作为外植体；（2）启动培养：将灭菌后的外植体接种到经高温灭菌的启动培养基中培养，培养条件为温度 25～27℃，光照强度为2400‑2500lx，光照时间15‑16h/d，在培养室中无菌培养23‑25天后，将没有染菌的材料切成带 1～2 个芽的茎段接种于分生培养基中培养，分生培养基的成分为：MS+ N6 苄基腺嘌呤（6‑BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +维生素B1 1.6‑1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+琼脂7g/L，培养基pH 值为6.0；在光照强度为2300‑2400lx，光照时间14‑15h/d，温度为26‑27℃的条件下，培养30‑35天；（3）继代培养：将植株茎段转接入经高温消毒的继代培养基，在培养温度为25‑26℃，光强 2000～2500lx，光照时间为17h/d的条件下培养33‑35d；（4）生根培养：在无菌条件下，剪取长2‑3cm继代培养得到的带叶茎段，插入生根培养基中进行生根培养；培养温度26～28℃，光强2000～22001x，光照时间15h/d；（5）炼苗：当经过生根培养后的生根试管苗根长约1.0～2.0cm时，将组培苗进行室内炼苗，炼苗温度为：27‑28℃，光照强度为5000‑6500lx，室内瓶炼5‑6天后，敞口炼苗4天；（6）移栽：取出试管苗，洗净根上的培养基，移栽到用0.2%KMnO 4 消毒过的米糠+黄土+细河沙+草炭按照2‑3:5:1:0.5的比例做基质的营养杯中，浇足水，保持空气湿度为85％‑90%，温度25～26℃，避免阳光直射，35‑38天后，移出温室进行全光照炼苗6‑7d，及时浇水，然后移栽大田；所述的化橘红的组培快繁方法，步骤（2）中的启动培养基的成分为：MS+ N6 苄基腺嘌呤（6‑BA) 1.3mg/L+萘乙酸（NAA）0.3mg/L+维生素B11.0mg/L+3%糖蜜+琼脂6‑7g/L，培养基pH值为6.2；所述的化橘红的组培快繁方法，步骤（3）中所述步骤（3）中继代培养基的成分为：MS+N 6 苄基腺嘌呤（6‑BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.45‑0.55mg/L+维生素B1 0.8mg/L+维生素C1.4‑1.6mg/L+谷氨酸1.8～2.1mg/L+4%糖蜜+琼脂8g/L，培养基pH值为6.1；所述的化橘红的组培快繁方法，步骤（4）中生根培养基的成分为：1/2MS+NAA0.02mg/L+ABT0.2mg/L+IBA0.7～0.9mg/L+4.5%糖蜜+琼脂8g/L，pH=6.0‑6.2。