[发明专利]鸽圆环病毒样颗粒、其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种鸽圆环病毒样颗粒、其制备方法与应用。本发明将鸽圆环病毒ORF C1基因与昆虫细胞表达载体连接，利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统获得鸽圆环病毒样颗粒。将所述鸽圆环病毒样颗粒与防腐剂和佐剂混合，即制备得到鸽圆环疫苗。本发明的鸽圆环病毒样颗粒及其疫苗能高效诱导机体产生抗体，填补了国内此类疫苗的空白。本发明的制备方法适于工业化生产，具有成本低、安全性高等优点。

主权项

1.一种鸽圆环病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的鸽圆环病毒ORF C1基因插入到昆虫细胞表达载体中，转化含有重组杆状病毒基因组的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，提取阳性质粒，制得整合了鸽圆环病毒ORF C1基因的重组杆状病毒Bacmid质粒；所述昆虫细胞表达载体为pFastBac1；所述重组杆状病毒为重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒rAcMNPV；（2）将步骤（1）制得的重组杆状病毒Bacmid质粒转染昆虫细胞，拯救获得整合了鸽圆环病毒ORF C1基因的重组杆状病毒；所述步骤（2）中，昆虫细胞为草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）Sf21细胞系；（3）将步骤（2）制得的整合了鸽圆环病毒ORF C1基因的重组杆状病毒接种昆虫细胞，培养后收获，经蔗糖密度梯度离心进行纯化，蔗糖质量体积浓度为10%、30%和50%，单位g/mL，制得鸽圆环病毒样颗粒。