[发明专利]促进肝细胞miR-199b高表达的慢病毒表达载体及其构建方法

摘要

本发明提供一种促进肝细胞miR‑199b高表达的慢病毒表达载体，包括pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro病毒载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和含有绿色荧光基因的Pri‑miRNA‑199b序列产物；所述多克隆位点序列包括Nhe I酶切位点和BamH I酶切位点，所述含有绿色荧光基因的Pri‑miRNA‑199b序列产物正向插入所述多克隆位点序列中。本发明属于基因工程技术领域，本发明提供的重组慢病毒表达载体具有转染效率高，用量少的优点，可在人源肝细胞中持续、高效、稳定地提高miRNA‑199b表达。

主权项

1.一种促进肝细胞miR‑199b高表达的慢病毒表达载体，其特征在于：包括pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro病毒载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和含有绿色荧光基因的Pri‑miRNA‑199b序列产物；所述多克隆位点序列包括Nhe I酶切位点和BamH I酶切位点，所述含有绿色荧光基因的Pri‑miRNA‑199b序列产物正向插入所述多克隆位点序列中；所述含有绿色荧光基因的Pri‑miRNA‑199b序列产物通过PCR扩增获得，以Pri‑miRNA‑199b重组质粒为模板，PCR引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列为：CTAGCTAGCATGGCCCAGTCCAAGCAC，即SEQ ID NO：1，所述下游引物的序列为：CGGGATCCATCCTCTCAGTCTTCCTC，即SEQ ID NO：2；所述Pri‑miRNA‑199b重组质粒包括pCI MammaLian Expression Vector表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和Pri‑miRNA‑199b序列；所述多克隆位点包括EcoR I酶切位点和Kpn I酶切位点，所述Pri‑miRNA‑199b序列正向插入所述多克隆位点序列中。