[发明专利]一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺

摘要

本发明公开了一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺，包括下列步骤：用deer‑IGF‑Ⅰ基因片段和PET32a质粒构建重组质粒；对重组质粒进行扩增，筛选出单克隆阳性的重组质粒；将单克隆阳性的重组质粒转化入BL21(DEa)大肠杆菌中得到重组子，在培养基中通过重组子进行deer‑IGF‑Ⅰ蛋白诱导表达；将重组子的菌体从培养基中分离，并在破菌缓冲液中，进行破菌，使deer‑IGF‑Ⅰ蛋白以包涵体的表达形式进入破菌缓冲液，并将包涵体与破菌缓冲液分离；用变性剂使包涵体变性为可溶性融合蛋白溶解在变性剂中，将变性剂逐滴加入蛋白复性液，对变性剂中的可溶性融合蛋白进行复性；再对复性后的可溶性融合蛋白进行纯化和酶切，得到deer‑IGF‑Ⅰ蛋白；对deer‑IGF‑Ⅰ蛋白进行纯化、透析除盐和浓缩。

主权项

一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺，包括下列步骤：1)用deer‑IGF‑I基因片段和PET32a质粒构建重组质粒；2)对所述重组质粒进行扩增，并从中筛选出单克隆阳性的重组质粒；3)将单克隆阳性的重组质粒转化入BL21(DEa)大肠杆菌中得到重组子，在培养基中通过所述重组子进行deer‑IGF‑I蛋白诱导表达；4)将所述重组子的菌体从所述培养基中分离，并在破菌缓冲液中，对所述重组子的菌体进行破菌，使deer‑IGF‑I蛋白以包涵体的表达形式进入所述破菌缓冲液，并将所述包涵体与所述破菌缓冲液分离；5)用变性剂使所述包涵体变性为可溶性融合蛋白，溶解在所述变性剂中，所述可溶性融合蛋白是由deer‑IGF‑I蛋白和硫氧还原蛋白结合而成的，将所述变性剂逐滴加入蛋白复性液对所述可溶性融合蛋白进行复性，所述可溶性融合蛋白中的deer‑IGF‑I蛋白在所述蛋白复性液中恢复正确折叠结构；6)对复性后的可溶性融合蛋白进行纯化和酶切，使所述可溶性融合蛋白分离为硫氧还原蛋白和具有正确折叠结构的deer‑IGF‑I蛋白；7)对具有正确折叠结构的deer‑IGF‑I蛋白进行纯化、透析除盐和浓缩。