[发明专利]一种梅花鹿胰岛素样生长因子真核表达纯化方法在审
申请号: | 201610322353.2 | 申请日: | 2016-05-16 |
公开(公告)号: | CN105838732A | 公开(公告)日: | 2016-08-10 |
发明(设计)人: | 陈建兵;王瑜;党平 | 申请(专利权)人: | 上海蓝庄生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/81 | 分类号: | C12N15/81;C07K14/65;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12R1/84 |
代理公司: | 上海兆丰知识产权代理事务所(有限合伙) 31241 | 代理人: | 屠轶凡 |
地址: | 201799 上海市青浦*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了一种梅花鹿胰岛素样生长因子真核表达方法,包括下列步骤:1)将deer‑IGF‑Ⅰ基因片段克隆入pPIC9k质粒,构建重组质粒;2)对所述重组质粒进行扩增,并从中筛选出阳性的重组质粒;3)用SalⅠ酶对阳性的重组质粒进行酶切线性化,并将酶切线性化后的阳性的重组质粒电转化入巴斯德毕赤酵母GS115,得到阳性重组子;4)在BMGY培养基中通过甲醇对所述阳性重组子进行诱导表达,使所述阳性重组子诱导表达可溶于BMGY培养基的deer‑IGF‑Ⅰ蛋白;5)从BMGY培养基分离出deer‑IGF‑Ⅰ蛋白。其技术效果是:纯化方法简便,无需进行蛋白的变性复性,蛋白的结构更稳定,经济效益更高,便于大规模制备,应用前景广。 | ||
搜索关键词: | 一种 梅花鹿 胰岛素 生长因子 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】:
一种梅花鹿胰岛素样生长因子真核表达方法,包括下列步骤:1)将deer‑IGF‑I基因片段克隆入pPIC9k质粒,构建重组质粒;2)对所述重组质粒进行扩增,并从中筛选出阳性的重组质粒;3)用Sal I酶对阳性的重组质粒进行酶切线性化,并将酶切线性化后的阳性的重组质粒电转化入巴斯德毕赤酵母GS115,得到阳性重组子;4)在BMGY培养基中通过甲醇对所述阳性重组子进行诱导表达,使所述阳性重组子诱导表达可溶于BMGY培养基的deer‑IGF‑I蛋白;5)从BMGY培养基分离出deer‑IGF‑I蛋白。
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