[发明专利]一种高效表达与制备外分泌型人源CA125的方法在审
| 申请号： | 201610321064.0 | 申请日： | 2016-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN105950647A | 公开（公告）日： | 2016-09-21 |
| 发明（设计）人： | 欧文斌;孟凡国;刘丽;严子琴;李海龙 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学;浙江清华长三角研究院 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C07K14/705;C07K1/30;C12R1/84 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 翁霁明 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种高效表达与制备外分泌型人源CA125的方法，该方法主要包括如下三个方面的内容：(1)利用基因合成技术合成CA125的DNA序列，再采用基因克隆和分子生物学方法构建酵母重组表达质粒PpICZαA‑CA125，并进行质粒抽提；(2)使用毕赤酵母表达系统体外诱导表达分泌型CA125重组蛋白，并通过优化表达时间、诱导剂添加量等条件得出最佳诱导条件；(3)优化硫酸铵分级沉淀,从发酵液上清中分离纯化得到分泌到胞外的CA125重组蛋白，在55％硫酸铵浓度下目的蛋白CA125几乎全部析出，本发明将纯化得到的分泌重组蛋白CA125用临床检测电化学发光法检测其生物活性，其值达802100U/mL。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 制备 外分泌 型人源 ca125 方法 | ||
【主权项】：
一种高效表达与制备外分泌型人源CA125的方法，其特征在于该方法主要包括如下三个方面的内容：(1)利用基因合成技术合成CA125的DNA序列，再采用基因克隆和分子生物学方法构建酵母重组表达质粒PpICZαA‑CA125，并进行质粒抽提；(2)使用毕赤酵母表达系统体外诱导表达分泌型CA125重组蛋白，并通过优化表达时间、诱导剂添加量等条件得出最佳诱导条件；(3)优化硫酸铵分级沉淀,从发酵液上清中分离纯化得到分泌到胞外的CA125重组蛋白，在55％硫酸铵浓度下目的蛋白CA125几乎全部析出，经电化学发光法检测其生物活性，其生物活性值达802100U/mL。
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