[发明专利]一种离体茎测定烟草疫霉致病力的方法

摘要

本发明公开了一种离体茎测定烟草疫霉致病力的方法，包括以下步骤：（1）烟草疫霉菌丝块制备；（2）离体茎制备；（3）接种；（4）致病力测定与评价。本发明方法简便易行，病原菌致病性表现稳定，重复性好，结果可靠，可准确地反映烟草疫霉的致病力及其致病强度；在实际操作中，可批量进行，具有占用空间小、节约劳动成本、缩短实验周期的优点。因此，本发明方法适合推广应用。

主权项

一种离体茎测定烟草疫霉致病力的方法，其特征在于包括烟草疫霉菌丝块制备、离体茎制备、接种、致病力测定与评价步骤，具体包括：A、烟草疫霉菌丝块制备：将烟草疫霉接种至OA培养基平板，于25~28℃下黑暗培养7~10天，将平板菌丝切成菌丝块；B、离体茎制备：选取培育60~70天的烟苗或培育10~15天新长出的腋芽，提前2~3天剪掉烟苗或腋芽的叶片和叶柄，以让伤口自我修复，剪取烟草同一茎位的茎段，切口处用灭菌脱脂棉包裹，均匀置于灭菌的培养床上；C、接种：于茎段中部表皮处进行刺孔，将A步骤获得的菌丝块菌丝面紧贴于离体茎刺孔中部位置；D、致病力测定与评价：将接种后的离体茎于湿度80~85%、温度25~28℃条件下黑暗培养，每天观察发病情况，以病斑长度区分致病力及其致病强度。