[发明专利]一种银纳米簇传感器及其制备方法和在检测病毒基因中的应用

摘要

本发明提供了一种银纳米簇传感器及其制备方法和在测定病毒基因中的应用，该传感器为DNA荧光传感器，所述DNA为分子信标型多功能DNA序列，在其3'端修饰有猝灭剂。其制备方法包括设计多功能DNA序列、形成分子信标型DNA序列和制备银纳米簇传感器三个步骤。本发明构建的传感器能够同时检测多种病毒基因，有效弥补单一基因检测结果不准确的缺陷。

主权项

1.一种激活型荧光银纳米簇传感器，并应用于多靶标基因同时检测，该传感器为DNA荧光传感器，其特征在于：所述DNA为分子信标型多功能DNA序列，从5'端到3'端依次为银纳米簇的模板序列称为功能片段I、互补序列或识别序列称为功能片段II、与识别序列5'端序列部分互补的6碱基序列称为功能片段III，3'端修饰有猝灭剂；多功能DNA为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列，以SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2作为模板制备出的银纳米簇具有强的荧光信号；当不存在靶标基因时，银纳米簇与猝灭剂靠近，发生荧光共振能量转移，荧光猝灭；当存在一种靶标时，由于靶标基因与环状区的识别序列发生特异性结合，发夹结构打开，银纳米簇远离猝灭剂，激活一种颜色银纳米簇的荧光信号，荧光增强检测单一基因；以SEQ ID NO.1作为模板的银纳米簇发射绿色荧光，以SEQ ID NO.2作为模板的银纳米簇发射红色荧光，两种颜色荧光强度在同一数量级，当存在两种靶标时，同时激活两种颜色银纳米簇的荧光信号，荧光激活同时检测多靶标基因；/n上述激活型荧光银纳米簇传感器的制备方法，包括以下步骤：/n步骤1，设计多功能DNA序列，该多功能DNA序列从5'端到3'端依次为银纳米簇的模板序列、识别序列及其部分互补序列，在3'末端修饰有猝灭剂；/n步骤2，形成分子信标型DNA序列，将步骤1的多功能DNA序列进行热变性并退火，在1.5mL规格离心管中加入500 μL 20 mM pH为7的柠檬酸缓冲溶液，取90 μL 100 μM多功能DNA序列，混合均匀，放入95°C水浴锅使之变性10分钟，快速放入冰水浴中保持1小时；/n步骤3，制备银纳米簇传感器，以步骤2所得分子信标型DNA序列作为稳定剂，放入冰水浴中保持10分钟，依次加入硝酸银和硼氢化钠发生还原反应，加入5.4 μL硝酸银工作溶液震荡2分钟，混合均匀，避光放入冰水浴中继续冰浴15分钟；加入5.4 μL新鲜制备的硼氢化钠工作溶液，快速混匀，反应5分钟，避光放入4°C冰箱保存过夜，得到激活型分子信标型银纳米簇传感器；制备银纳米簇传感器的多功能DNA序列、硝酸银、硼氢化钠的摩尔比为1 : 6 :6；制备得到分子信标型银纳米簇，所述银纳米簇传感器其粒径为1～2 nm；绿色银纳米簇的激发波长为445 nm，发射波长为520 nm；红色银纳米簇的激发波长为525 nm，发射波长为595 nm，并且两种颜色荧光强度在同一数量级。/n